柴油机喷油器常见故障及维修要点
图6－9 不同封闭状态的血影细胞和小泡的制备
（引自B.Alberts等，2002年）
参照前书图9-9
要了解某个膜蛋白是否属跨膜蛋白，位于膜的哪一面以及它的分子量、带电状况
等，有以下数种方法可采用：①用一种水溶性的共价结合物如放射性物质或荧光素标记
膜蛋白，该物质不能穿入脂双层，只共价结合于膜表面的某些基团，然后用SDS聚丙
烯酰胺凝胶电泳分离膜蛋白，所标记的蛋白因放射性或荧光存在就清楚地显示出它处在
电泳凝胶上某一带。它在膜上的情况是这样获知的：先使标记物与完整的细胞作用，从
外面接触膜，再使标记物与内面向外的小泡作用，从内面接触膜。如果这两种情况都得
到同一标记电泳带，说明这个膜蛋白是个跨膜蛋白；如果只在一种情况下得到这一标记
电泳带，说明这个膜蛋白位于膜的内面或外面。②用一种不能透过膜的蛋白水解酶分别
接触膜的内、外面，如果某一蛋白在两种情况下都被水解，则这是一个跨膜蛋白。③用
标记抗体分别接触膜的内、外面，如果两面都有特异结合，则是跨膜蛋白。
3．冷冻蚀刻技术 又称冷冻断裂蚀刻技术，该技术将细胞膜冷冻、断裂和蚀刻后
制成复型膜在透射电镜下观察，提供在一定膜区域内膜蛋白数目、大小的信息，特别重
要的是提供膜蛋白在膜的两个半层的分布位置的信息。图6－10A示意了该技术的原理
和断裂表面的命名（参见第二章电子显微镜技术节）。例如，用冷冻蚀刻技术制备红细
胞质膜的复型膜，可以看到在两个断裂面上有散在的大小均匀的斑点，斑点直径约
7.5nm，在P面上比E面上更集中些，这些都是带3蛋白（详见下述）。因为把提纯的
带3蛋白整合进人工合成的脂双层后，其冷冻断裂面上也同样能看到这种斑点。在两个
半层被断裂劈开时，膜蛋白颗粒往往留在本身大部分所在的那个半层上，从对面半层中
“拔”出来的那部分就突起在断裂面上，如果这部分足够大，就能被看到，由此可以推
断膜蛋白所在半层和膜蛋白的结构特点。图6－10B可说明在冷冻断裂技术制备的红细
胞膜上，为什么能看到带3蛋白而看不到血型糖蛋白之类的膜蛋白。血型糖蛋白的大部
分伸出在质膜外表面，突出在断裂面上的那部分很小，因而不能被看到。
图6－10 冷冻蚀刻技术原理和显示的膜蛋白
（引自Alberts等，2002）
参照前书图9-10
4．光漂白后荧光素复原和光漂白中荧光素丢失 膜蛋白侧向扩散速率是用一种叫
做“光漂白后荧光素复原”（FRAP——fluorescence recovery after photo-bleaching）的
技术来测量的。此法最早用来测量视紫红质分子的扩散。方法是用一束强光照射排列着
视紫红质分子的细胞膜一部分，被照的这些分子中的发色基团就被漂白，经过很短的时
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