透析袋(8)

试剂2ml，再放沸水浴5min。

观察各管颜色变化，并解释实验结果。 （二）蔗糖酶的特异性

取试管5支，标号，按下表所列的次序操作：

试管编号

试剂

1%淀粉溶液（ml） 2%蔗糖溶液（ml） 蔗糖酶（ml） 蒸馏水（ml）

1

1.0 — — 1.0

2

— 1.0 — 1.0

3

1.0 — 1.0 —

4

— 1.0 1.0 —

5

— — 1.0 1.0

各管加完试剂后，放37℃恒温水浴保温10min，然后每管加入Benedict试剂2ml，再放沸水浴5min。

观察各管颜色变化，并解释实验结果。 【要点提示】

1.蔗糖是典型的非还原糖，若商品中还原糖的含量超过一定的标准，则呈现还原性，这种蔗糖不能使用。一般在实验前要对所用的蔗糖进行检查，至少要用分析纯试剂。

2.由于不同的人或同一个人不同时间采集的唾液内淀粉酶的活性并不相同，有时差别很大，所以唾液的稀释倍数可根据各人的唾液淀粉酶的活性进行调整，一般为20～200倍。

3.制备的蔗糖酶液一般情况下含有少量的还原糖杂质，所以可出现轻度的阳性反应。另外，不纯净的淀粉及加热过程中淀粉的部分降解，也可出现轻度的阳性反应。

4.除了含有淀粉酶外，唾液中还含有少量的麦芽糖酶，可使麦芽糖水解为葡萄糖。 【思考题】

1.什么是酶的特异性？本实验如何验证了酶的特异性？

2.若将淀粉酶和蔗糖酶煮沸1min，其实验结果会发生什么样的变化？ 【参考文献】

1.北京大学生物系生物化学教研室．生物化学实验指导．人民教育出版社 . 1979

35

2.王秀奇 等．基础生物化学实验（第二版）．高等教育出版社．1999

实验五 酶促反应动力学

—— pH、温度、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响

一 pH值对酶活力的影响

【实验目的】

1.了解pH值对酶活力的影响 2.学习测定酶最适pH值的方法 【实验原理】

对环境酸碱度敏感是酶的特点之一。对每一种酶来说，只能在一定pH值范围内才表现其活力，否则酶即失活。另外，在这个有限pH值范围内，酶的活力也随着环境pH值的改变而有所不同。酶通常在某一pH值时，才表现最大活力。酶表现最大活力时的pH值称为酶的最适pH值。一般酶的最适pH值在4～8之间。 淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精和麦芽糖遇碘不呈色。在不同条件下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。

本实验观察pH值对唾液淀粉酶活力的影响，唾液淀粉酶的最适pH值约为6.8。 【器材与试剂】 （一）器材

1.恒温水浴锅 2.试管 3.试管架

4.锥形瓶（50 ml或100ml） 5.吸量管（1、2、5、10ml） 6.秒表 7.白瓷板 8.pH试纸

9.稀释200倍的新鲜唾液

在漏斗内塞入少量脱脂棉，下接洁净试管。漱口后收集过滤唾液。取滤液

最适pH值 pH 反应速度v 36

0.5m1放入锥形瓶内，加蒸馏水稀释至100m1，充分混匀。 （二）试剂

1.新配制的溶于0.3％NaCl的0.5％淀粉溶液

称取可溶性淀粉0.5g，先用少量0.3％NaCl溶液加热调成糊状，再用热的0.3％NaCl溶液稀释至100ml。

2. 0.2mol／L Na2HPO4溶液

称取Na2HPO4·7H2O 53.65g(或Na2HPO4·12H20 71.7g)，溶于少量蒸馏水中，移入1000ml容量瓶，加蒸馏水稀释到刻度。 。

3. 0.1mol／L柠檬酸溶液

称取含一个水分子的柠檬酸21.01g，溶于少量蒸馏水中，移入1000m1容量瓶，加蒸馏水至刻度。

4.KI－碘溶液:将KI 20g及I2 10g溶于100ml水中。使用前稀释10倍。 【实验步骤】 （一）

取50ml锥形瓶5个，编号。按下表中的比例，用吸量管准确添加

0.2mol/L Na2HPO4溶液和0.1mol/L柠檬酸溶液，制备pH5.0～8.0的5种缓冲溶液。

试剂

锥形瓶号

0.2mol/L Na2HPO4（ml） 0.1mol/L柠檬酸（ml）

1 2 3 4 5

5.15 6.31 7.72 9.36 9.72

4.85 3.69 2.28 0.64 0.28

缓冲液pH 5.0 6.0 6.8 7.6 8.0

（二）取干燥试管6支，编号。将5个锥形瓶中不同pH值的缓冲液各取3ml，分别加入相应号码的试管中。然后，再向每个试管中添加0.5％淀粉溶液2ml。第6号试管与第3号试管的内容物相同

（三）向第6号试管中加入稀释200倍的唾液2ml，摇匀后放入37℃恒温水浴锅

37

中保温。每隔1min由第6号试管中取出一滴混合液，置于白瓷盘上，加1滴KI－碘溶液，检验淀粉的水解程度。待结果呈橙黄色时，取出试管，记录保温时间。 （四）以1min的间隔，依次向第1至第5号试管中加入稀释200倍的唾液2ml，摇匀，并以1min的间隔依次将5支试管放入37℃恒温水浴锅中保温。然后，按照第6号试管的保温时间，依次将各管迅速取出，并立即加入KI－碘溶液2滴，充分摇匀。观察各管呈现的颜色，判断在不同pH值下淀粉被水解的程度，可以看出pH对唾液淀粉酶活力的影响，并确定其最适pH。 【要点提示】

1.掌握第6号试管的水解程度是本实验成败的关键之一。 2.淀粉溶液需新鲜配制，并注意配制方法。

3.严格控制温度。在保温期间，水浴温度不能波动，否则影响结果。 4.严格控制反应时间，保证每管的反应时间相同。

二 温度对酶活力的影响

【实验目的】

了解温度对酶活力的影响 【实验原理】

酶的催化作用受温度的影响很大，与一般化学反应一样，提高温度可以增加酶促反应的速

度。另一方面，大多数酶是蛋白质，温度过高可引起蛋白质变性，导致酶的失活。因此，反应速度达到最大值以后，随着温度的升高，反应速度反而逐渐下降，以至完全停止反应。反应速度达到最大值时的温度称为酶的最适温度。大多数动物酶的最适温度为37～40℃，大多数植物酶的最适温度为50～60℃。

最适温度不是酶的特征性物理常数。酶对温度的稳定性与其存在形式有关。低温能降低或抑制酶的活力，但不使酶失活。

淀粉与各级糊精遇碘呈现不同的颜色。最简单的糊精和麦芽糖遇碘不呈色。在不同温度下，唾液淀粉酶对淀粉水解活力的高低可通过水解混合物遇碘呈现颜色的不同来判断。 【器材与试剂】

38

反应速度v 温度t℃ 酶的最适温度 （一）器材

1.试管 2.试管架 3.恒温水浴锅 4.冰箱 5.漏斗 6.量筒

7.稀释200倍的新鲜唾液 （二）试剂

1.新配制的溶于0.3％NaCl的0.5％淀粉溶液

称取可溶性淀粉0.5g，先用少量0.3％NaCl溶液加热调成糊状，再用热的0.3％NaCl溶液稀释至100ml。

2.KI－碘溶液：将KI 20g及I2 10g溶于100ml水中。使用前稀释10倍。 【实验步骤】

（一）取试管3支，编号后按下表加入试剂：

试剂 淀粉溶液(ml) 稀释唾液(ml) 煮沸过的稀释唾液(ml)

(二)摇匀后，将1、3号试管放入37℃恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10min后取出（将2号管内液体分为两半），用KI－碘溶液来检验1、2、3号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果。将2号管剩下的一半溶液放入37℃水浴中继续保温10min，再用KI－碘溶液检验，结果如何？ 【要点提示】

1.唾液的稀释倍数应根据各人唾液淀粉酶活力进行调整。 2.严格控制恒温水浴锅的温度。

试管编号

1 1.5 1.0 -

2 1.5 1.0 -

3 1.5 - 1.0

39

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