指纹图谱的一种定性定量研究新方法总量统计矩分析法(4)

指纹图谱

１９８

药学学报Ａｃｔａ

ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａＳｉｎｉｃａ

２００８，４３（２）：１９５—２０１

为１１０７５８—２００１１０）等对照品购自中国药品生物制品检定所。

供试品的制备①对照品液：分别精密称取大黄酸、大黄素甲醚、芦荟大黄素对照品１０．２３、１０．１１

和１０．３４ｍｇ，用甲醇溶解定容至５０．０ｍＬ。制成含

大黄酸、大黄素甲醚、芦荟大黄素分别为０．２１２、

０．２０５和０．２１７ｍｇ ｍＬ。１的对照品溶液；另取三者

等量混合制成混合对照品液；②样品：称取各地大黄５０ｇ，用５倍量的９５％乙醇回流提取２次，每次

１

ｈ，抽滤，滤液回收溶剂至浸膏后再甲醇溶解，

０．４５弘ｍ微孔滤膜过滤，定容至５０ｍＬ，得含浸膏

１４０

ｍｇ ｍＬ。样品液，其中上海一２００６１０１５样品的

浸膏浓度为１６７．５６ｍｇ ｍＬ“的样品液，再稀释得

１６．７５６

ｍｇ ｍＬ“的样品液。

色谱条件Ｃ１８柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ

ＩＤ，５¨ｍ），

流动相：乙腈一水（含１％乙酸）梯度洗脱：０（５：９５）

＿＋１０

ｒａｉｎ（１０：９０）＿１５ｍｉｎ（２５：７５）－＋３０ｍｉｎ（３０：

７０）＿５０ｍｉｎ（４０：６０）＿７０ｍｉｎ（６０：４０）＿８０ｒａｉｎ

（７０：３０）＿９０ｒａｉｎ（９５：５）；ＵＶ检测：２５４ｎｍ。温

度：４０℃。

结果与讨论

１大黄指纹图谱的积分条件

精密吸取甲醇液１０斗Ｌ，进样测得指纹图谱Ｓ。，见图１。分别以峰宽、响应率、最小峰面积和最小峰高为０．０１ｓ、０斗Ｖ ｓ．。、０斗Ｖ ｓ、０“Ｖ的仪器最低值积分得空白甲醇全峰数２３６个，各参数用Ｅｘｃｅｌ软件进行计算，先由理论塔板数ｎ与保留时间（Ａ，）

的关系Ａ；／ｎ计算出各峰的方差，空格峰的ｒｔ以临近

的较小保留时间峰计。再依式（５）、（６）、（７）、（８）计算其他各总量统计矩参数：ＡＵＣ，为１．４０６×１０７斗Ｖ ｓ，∑Ａ， Ａｊ（保留时间与峰面积乘积和）为

７．４２８×１０８斗Ｖ ｓ ｒａｉｎ，∑盯； Ａｆ（峰方差与峰面

积乘积和）为２．８５６×１０５

ｐｖ ８ ｒａｉｎ２，∑Ａ； Ａ，

（保留时间平方与峰面积乘积和）为５．０８４×１０１０斗Ｖ ｓ ｒａｉｎ２，ＡＴ为５２．８４ｒａｉｎ，－－盯２Ｔ为３

６１７

ｍｉｎ２，

平均峰宽（４ｔｒ；）为４２．１５ｓ，平均响应率为１５０．３¨Ｖｓ～，平均峰面积为５．９５６×１０４肛Ｖｓ，平均峰高

为３１６７ＩｘＶ。

在进行梯度洗脱时，因洗脱剂的比例改变及甲醇的杂质产生稳定的空白对照峰，再按峰底宽、响应率、最小峰面积和最小峰高分别为０．Ｏｌ

ｓ、０斗Ｖ ８～、

１×１０５肛Ｖ ｓ和０肛Ｖ积分，得面积为１×１０５

ｔｒＶ ｓ

的峰２２个，其总量统计矩参数：ＡＵＣ，为１．０４１×１０７

灿Ｖ ｓ，∑Ａ， Ａ，为６．２３６×１０８斗Ｖ ｓ ｒａｉｎ，∑盯２ｆ

Ａｆ为１．９１１×１０５“Ｖ ￥ ｒａｉｎ２，∑Ａ； Ａｆ为４．４７７×

１０１０斗Ｖ ｓ ｒａｉｎ２，天Ｔ为５９．８７ｍｉｎ，盯－－Ｔ２为４

２９９

ｒａｉｎ２，平均峰宽（４孑ｉ）为３３．８７ｓ，平均响应率为

１４５１

ＩｘＶ ｓ～，平均峰面积为４．７３４×１０５

ｔｒＶ ｓ，

平均峰高为２．４５７×１０４恤Ｖ。将空白２２个峰当作色谱峰处理。依式（８）、（９），总峰数总量统计矩参数减去扣除２２个色谱峰的总量统计矩参数，得甲醇空白溶剂的总量统计矩参数：ＡＵＣ，为３．６４２×１０６ｔｒＶ ｓ，∑Ａ， Ａｊ为１．１９２×１０５斗Ｖ ｓ ｒａｉｎ，∑矿２ｆ

Ａｆ为９．４５０×１０４“Ｖ ｓ ｒａｉｎ２，∑Ａ； Ａ，为６．０７４×

１０９

ｐＶ ｓ ｒａｉｎ２，天Ｔ为３２．７３ｒａｉｎ，盯－－Ｔ２为５９６．６

ｒａｉｎ２。根据总量统计矩与正态峰参数的关系计算出各噪音峰的平均峰宽、平均响应率、平均最小峰面积和平均最小峰高分别为４４．６４

ｓ、４３．３３斗Ｖ ｓ～、

１．７０２×１０５斗Ｖ ｓ和９６７．１¨Ｖ。以信噪比３倍确定积分阈值：峰宽、响应率、面积总量和峰高为１３５

ｓ、

１３０Ｖ ｓ＿。、５１０００肛Ｖ ｓ和３０００斗Ｖ。

２仪器的精密度及混合对照品液的测定

大黄素甲醚对照品液的精密度：分别吸取同一样品液（０．２１１ｍｇ ｍＬ。）２０肛Ｌ，进样５次，按阈值积分得大黄素甲醚和甲醇溶剂指纹图谱的总量统计矩参数，按加合性相减得纯大黄素甲醚的总量统计矩参数ＭＣＲＴ“（６９．２６±１．５１９）ｒａｉｎ］，与原色谱峰保留时间ｔＲ［（７１．０７±１．６２０５）ｒａｉｎ］比较，两者没有差异（Ｐ＞０．０５），说明仪器的精密度和总量统计矩的加合性可信。

吸取芦荟大黄素、大黄酸和大黄素甲醚对照品混合液ｌｏ斗Ｌ进样测定得ｓ：（图１）。

大黄乙醇提取样品液的精密度：大黄乙醇提取物用甲醇进行溶解，分别吸取同一样品液（１６．７５６ｍｇ ｍＬ。１）１０“Ｌ，进样５次，按阈值对样品液指纹图谱积分得图１中Ｓ，。其峰数目（ＪＩ、ｒ）、最大峰面积（ＭａＡ）、最小峰面积（ＭｉＡ）、ＡＵＣ”∑Ａｆ Ａ，、∑盯２，

Ａｆ、∑Ａ； Ａ，、天，和孑；的ＲＳＤ分别为７％、１６％、

２９％、１６％、１７％、２８％、１９％、１．４％和４％，可见，

总量一阶矩天，和二阶矩砩稳定，反映了本法的抗

仪器噪音于扰能力强。

３大黄乙醇提取液指纹图谱不同积分条件参数的

测定

取同一批（１６．７５６ｍｇ ｍＬ“）大黄提取液２０¨Ｌ进样测定，分别按峰宽（ｓ）：响应率（Ｖ ｓ．１）：

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