第十三章 紫外可见光谱分析 - 图文(8)

ΔA值与干扰物的浓度无关。如果干扰物的吸收光谱如图13.24中曲线2所示的形状，则只要在曲线上找到同一直线上的3点的相应波长处测定，便可消除干扰成分。

4.实验步骤

1）黄酮的定性分析 在进行含量测定之前，首先取粉碎后植物的叶和果溶于70% 乙醇中，与HCl-Mg、AlCl3、Pb(Ac)3 反应，如果测试结果均为阳性，表明其中含有黄酮类化合物。

2）植物果叶中总黄酮的提取

研磨后准确称取植物叶、果各2.000g，加入70%的乙醇50mL，室温浸提24h后，在50℃的条件下超声波振荡提取1h，离心分离，取上清液备用，重复操作三次，减压浓缩后，精确转移至100mL容量瓶，70%乙醇定容备用。

3）测定波长的确定

将植物果和叶的提取物及芦丁标准品在适当的介质条件下，与1% AlCl3反应形成络合物而显色。与标准品溶液的吸收光谱对照，如果在417nm 处均有最大吸收峰，则表明可用芦丁作为标准品测定植物果叶中黄酮的含量。

准确吸取芦丁标准储备液1.0mL分别注入10mL容量瓶中，加1%的AlCl3溶液，充分混合至刻度，用1c m的比色皿在波长200～532nm范围内扫描，绘制出其吸收曲线，用作图法确定三个测定波长分别为λ1=463nm、λ2=417nm、λ3=382nm。

4）标准曲线的绘制

准确吸取芦丁标准溶液1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL、1.8mL、2.0mL分别置于10mL容量瓶中，加1%AlCl3 溶液，充分混合至刻度，在波长λ1=463nm、λ2=417nm、λ3=382nm 下分别测得吸光度，计算ΔA值，并计算ΔA与浓度关系的回归方程。

5）样品中总黄酮含量的测定

取植物叶和果的提取物，测定用1%的AlCl3溶液定容过的黄酮溶液在测定波长下的吸光度值，根据ΔA值，计算总黄酮含量。

5.数据处理

（1）绘制植物叶和果的提取物及芦丁标准品与1% AlCl3显色反应的吸收曲线确定测定波长。

（2）按照公式计算标准曲线的各ΔA值，计算ΔA与浓度关系的回归方程。 （3）由标准曲线计算植物叶和果中的总黄酮含量。

6.注意事项

（1）黄酮类物质广泛存在于各类植物体内，一般采集的各类水果、蔬菜、药材等均含有黄酮类物质。为确定采集的植物体内确有黄酮类物质，可先按照实验步骤1进行黄酮的定性分析。

（2）本实验中的吸收光谱图以刺五加的叶和果与芦丁对照绘制，并确定了λ1、λ2和λ3

的测定波长。实际测定的植物样品，可根据植物提取物与芦丁标准品的吸收光谱图选择各自合适的λ1、λ2和λ3的测定波长。

（3）1% AlCl3溶液的用量在0.5～2.5mL范围内几乎不影响测定结果。

7.思考题

（1）详细推导三波长分光光度法ΔA值的计算公式。

（2）将三波长分光光度法应用于实际样品测定时，如何选择λ1、λ2和λ3的测定波长？

参考文献

[1] 朱明华．仪器分析[M]，北京：高等教育出版社，2008．

[2] 黄君礼，鲍治宇．紫外吸收光谱法及其应用[M]，北京：中国科学技术出版社，1992． [3] 陈结，宋启泽．有机波谱分析[M]，北京：北京理工大学出版社，2008． [4] 钱沙华，韦进宝．环境仪器分析[M]，北京：中国环境科学出版社，2004． [5] 张剑荣，戚苓，方惠群．仪器分析实验[M]，北京：科学出版社，2002．

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