中国药科大学药物分析期末重点(3)

与亚硝基铁氰化钠反应：重酒石酸间羟胺的脂肪伯氨基，取本品5mg，加水0.5ml使溶解，加亚硝基铁氰化钠试液2滴，丙酮2滴，与碳酸氢钠0.2g，在60度的水浴中加热1分钟，即显红紫色。注：脂肪伯氨基的专属反应，丙酮不含有甲醛

双缩脲反应：芳环侧链有氨基醇结构 特殊杂质检查：

酮体检查：酮体氢化还原制得，若氢化不完全则引入酮体杂质。 紫外分光光度法检查酮体的条件及要求

药物

检查的杂质

溶剂

样品浓度(mg/ml) 2.0 2.0 2.0 2.0 1.5

测定波长(nm) 310 310 310 310 347

A

肾上腺素 盐酸去氧肾上腺素 重酒石酸去甲肾上腺素 盐酸异丙肾上腺素 盐酸甲氧明

肾上腺酮 酮体 去甲肾上腺酮 酮体 酮胺

HCl(9→2000) 水 水 水 水

不得过0.05 不得大于0.20 不得大于0.05 不得大于0.15 不得大于0.06

有关物质检查：TCL法 含量测定：

非水溶液滴定法（弱碱性）：冰醋酸为溶剂，加入醋酸汞消除氢卤酸的干扰，以结晶紫为指示剂 （盐酸甲氧明的指示剂为萘酚苯甲醇

也可电位法指示终点），若碱性较弱则加醋酐使突跃明显

注：加入醋酐注意防止氨基被乙酰化，所以在冰醋酸溶解样品后应放冷后再加醋酐。

溴量法：分子中的苯酚结构，在酸性溶液中酚羟基的邻、对位活泼氢能与过量的溴定量的发生溴代反应，再以碘量法测定剩余的溴，根据消耗的硫代硫酸钠滴定液的量，即可计算供试品的含量。 提取酸碱滴定法

原理：溶解性－盐酸盐或硫酸盐可溶于水，游离碱不溶于水，溶于有机溶剂。

方法：供试品溶于水或矿酸，加入适量碱性试剂使药物游离，用适当的有机溶剂提取，将提取液蒸干，残渣中加中性乙醇溶解，用标准酸滴定液直接滴定（或在提取液中加定量过量的标准酸滴定液，蒸去有机溶剂后，再用标准碱滴定液回滴定）。

第八章 杂环类药物的分析

吡啶环的开环反应：适用于吡啶环B或Y位被羧基衍生物所取代的异烟肼和尼克刹米

戊烯二醛反应（k?ning反应）：溴化氰与芳伯按作用于吡啶环，使环上氮原子由3价转变为5价，吡啶环发生水解反应生成戊烯二醛，再与芳伯胺缩合，生成有色的戊烯二醛衍生物，其颜色随所用芳伯胺的不同有所差异

二硝基氯苯反应（Vongerichten反应）：在无水的条件下，吡啶及其衍生物与2,4-二硝基氯苯混合共热或加热至熔融，冷却后，加醇制氢氧化钾溶液将残渣溶解，溶液呈紫红色。异烟肼－氧化成羧基；尼克刹米－水解成羧基 酰肼基的反应：

还原反应：异烟肼与氨制硝酸银试液反应，即生成金属银黑色浑浊和气泡（氮气），并在玻璃试管壁上产生银镜，异烟肼被氧化为异烟酸铵；异烟肼与亚硒酸作用，可将其还原成红色硒的沉淀。

缩合反应：异烟肼的酰肼基与芳醛缩合形成腙，其有固定的熔点，可用于鉴别；异烟肼与1,2-萘醌-4-磺酸在碱性介质中可缩合呈红色，凡具有芳香胺基或活性亚甲基者均有此反应。 异烟肼中肼的检查 1、TLC

检查方法：取本品，加水制成每1ml 中含50mg的溶液，作为供试品溶液。另取硫酸肼 加水制成每1ml 中含0.20mg（相当于游离肼50μg ）的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（附录ⅤB）试验，吸取供试品溶液10μl 与对照溶液2μl，分别点于同一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇－丙醇(3:2) 为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15分钟后检视。在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。 －－限度：0.02%。 2、比浊法

JP(14)采用样品中加水杨酸的乙醇溶液观察浑浊的方法－专属性差 3、差示分光光度法

原理：肼－对-二甲氨基苯甲醛→黄色缩合物（对-二甲氨基苯甲醛连氮）465nm波长有最大吸收 异烟肼－对-二甲氨基苯甲醛→缩合物（对-二甲氨基苄叉） 465nm波长无吸收

加入3%丙酮，可使得黄色缩合物（对-二甲氨基苯甲醛连氮）变为无色的二甲基甲酮连氮，继而作为参比，用于测定△A456nm，并以对照品比较法计算游离肼的含量。 －－专属、准确、灵敏，最低检测限可达0.1μg/ml。 尼克刹米中有关物质的检查 TLC

无杂质对照品－高低浓度对比法

检查方法：取本品，加甲醇制成每1ml 中含40mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加甲醇分别稀释成每1ml 中含0.4mg 和40μg的溶液，作为对照溶液(1)和(2) 。照薄层色谱法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述三种溶液各10μl ，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿－丙醇(75:25)为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液(2)的主斑点比较，不得更深 ；如有1点超过时，应不深于对照溶液(1)的主斑点。 绿奎宁反应

机制：奎宁和奎宁丁为6-位含氧喹啉类衍生物，6-位含氧喹啉，经氯水（或溴水）氧化氯化，再以氨水处理缩合，生成绿色的二醌基亚胺的铵盐；

方法：取其水溶液，加溴试液0.2ml和氨试液1ml，即显翠绿色，加酸成中性变成蓝色，成酸性时则为 紫红色

托烷生物碱的鉴别试验

氧化反应：水解生成的莨菪酸，在硫酸和重铬酸钾在加热条件下，发生氧化反应，生成苯甲醛，逸出苦杏仁的臭味。 沉淀反应：碱性－生物碱沉淀剂生成沉淀

例：阿托品：氯化汞醇试液→黄色沉淀 东莨菪碱：氯化汞醇→白色复盐沉淀 吩噻嗪类药物：为苯并噻嗪的衍生物，分子结构中均含有硫氮杂蒽母核

硫氮杂蒽母核为共轭三环的π系统，紫外区三个吸收峰值，约205nm、254nm、300nm，最强多在254nm附近

二价硫可与金属钯离子形成红色的配位化合物，而氧化产物亚砜、砜则无此反应， 含量测定

非水溶液滴定法（排除干扰法）：

适用范围：pKb > 8的有机弱碱性药物及其盐类

酸根的影响：加入定量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其生成在醋酸中难解离的卤化汞，以消除氢卤酸对滴定的干扰和不良影响。

滴定剂的稳定性：醋酸具有挥发性，切膨胀系数大，因此温度和贮存条件影响滴定剂的浓度。 终点的指示方法：电位滴定法，指示剂法

其他干扰：大都经碱化处理，有机溶剂提取分离游离碱后，再用高氯酸滴定液滴定。 氧化还原滴定法—铈量法

二氢吡啶类药物：用邻二氮菲指示液指示终点，终点时，微过量的Ce4+将指示液中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙红色配合物离子转化为淡蓝色或无色的配合物离子，以指示终点的到达。

吩噻嗪类药物：硫酸铈滴定时，先失去一个电子形成一种红色的自由基离子，达到化学计量点时，溶液中的吩噻嗪类药物均失去两个电子，而红色消退，借以用药物自身颜色变化指示终点。 酸性染料比色法

原理：在适当的介质中，碱性药物(B) 可与氢离子结合成(BH+)，而一些酸性染料可解离为(In-)，两者定量结合成有色络合物(BH+ In-)离子对，可被有机溶剂定量提取，在一定波长处测定其吸收，即可算出碱性药物的含量。 水相最佳pH的选择：使有机碱药物和酸性染料分别全部以BH+和In-状态存在

酸性染料及其浓度：定量结合，离子对溶解性好，且在其最大吸收波长处有较高的吸光度；染料在有机相中不溶或很少溶解

有机溶剂的选择：提取效率高，氯仿最理想 水分的影响：影响结果，脱水剂或滤纸除去水分

酸性染料中的有色杂质：在加入供试品之前，将缓冲液与酸性染料的混合液先用所选用的有机溶剂萃取弃去。 离子对高效液相色谱法：

适用范围：解离强度大的酸性或碱性物质的色谱保留

原理：在流动相中加入与呈解离状态的待测组分离子电荷相反的离子对试剂，形成离子对化合物后，使待测组分在非极性固定相中的分配与溶解度增大，从而改善其色谱保留与分离行为的色谱法。 分析碱性物质：烷基磺酸盐阴离子对试剂，如十二烷磺酸钠 分析酸性物质：季铵盐阳离子对试剂，如四丁基溴化铵

第九章 维生素类药物的分析

三氯化锑反应（现象）：维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶液中即显蓝色，渐变成紫红色。其机制为维生素A与三氯化锑中存在的亲电试剂氯化高锑作用形成不稳定的蓝色碳正离子。 维生素A的含量测定—紫外分光光度法（三点校正波长法）P248

原理：在三个波长处测得吸光度后，在规定的条件下以校正公式进行校正，再进行计算，这样可消除无关吸收的干扰，求得维生素 A的真实含量。

原理基础：（1）杂质的无关吸收在310—340nm的波长范围内几乎呈一条直线，且随波长的增大吸光度下降 （2）物质对光吸收呈加和性的原理，即在某一样品的吸收曲线上，各波长处的吸收度是维生素A与杂质吸光度的代数和，因而吸收曲线也是二者吸收的叠加。

维生素B1的结构特点：是由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季铵类化合物，噻唑环上季铵及嘧啶环上氨基，为两个碱性基团，可与酸成盐。

维生素B1的硫色素反应：噻唑环在碱性介质中可被高铁氰化钾等氧化剂氧化，然后与嘧啶环上的-NH2缩合生成具有荧光的硫色素，后者易溶于异丁醇中显强烈的蓝色荧光，该反应又称为硫色素荧光反应。为维生素B1所特有 维生素C的鉴别反应：

与硝酸银反应：维生素C分子中有烯二醇基，具有还原性，可被硝酸银；氧化为去氢抗坏血酸，同时产生黑色金属银沉淀；

与2,6-二氯靛酚反应：2,6-二氯靛酚反应为一染料，其氧化型在酸性介质中为玫瑰红色，碱性介质中为蓝色， 与维生素C作用后生成还原型无色的酚亚胺。

与其他氧化剂反应：维生素C可被亚甲蓝、高锰酸钾、碱性酒石酸铜试液、钼磷酸等氧化剂氧化为去氢抗坏血酸，同时抗坏血酸可使

其试剂褪色，产生沉淀或呈现颜色。

糖类反应：维生素C可在三氯化醋酸或盐酸存在下水解、脱羧、生成戊糖，再失水，转化为糠醛，加入吡咯，加热至50度产生蓝色。 维生素C的含量测定：

碘量法：维生素C在醋酸酸性条件下，可被碘定量氧化。

2,6-二氯靛酚滴定法：2,6-二氯靛酚反应为一染料，其氧化型在酸性介质中为玫瑰红色，碱性介质中为蓝色， 与维生素C作用后生成

还原型无色的酚亚胺。因此，维生素C在酸性溶液中，可与2,6-二氯靛酚标准液滴定至溶液显玫瑰红色为终点，

无需另加指示剂。

维生素E的结构：为苯并二氢吡喃衍生物，苯环上有一个乙酰化的酚羟基，故又称生育酚醋酸酯。 维生素E的鉴别反应：

硝酸反应：维生素E在硝酸酸性条件下，水解生成生育酚，生育酚被硝酸氧化为邻醌结构的生育红而显橙色 三氯化铁反应：维生素E在碱性条件下，水解生成游离的生育酚，生育酚经乙醚提取后，可被FeCl3氧化成对-生育醌，同时Fe3+被还原为Fe2+，Fe2+与联吡啶生成红色的配位离子。 杂质检查—生育酚

原理：利用游离生育酚的还原性，可被硫酸铈定量氧化。

方法：取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈滴定液滴定，消耗硫酸铈滴定液不得超过1.0ml。

含量测定—气相色谱法：内标法，精密度较高。

第十章 甾体激素类药物的分析

分类：可的松、黄体酮、睾丸素、雌二醇 按药理作用分类：肾上腺皮质激素、性激素 鉴别反应：

C17-a-醇酮基的呈色反应（只应用于肾上腺皮质激素）：碱性酒石酸酮试液（斐林试液）、氨制硝酸银试液（多伦试液）、四氮唑试液

酮基的呈色反应：与羰基试剂，如异烟肼、2,4-二硝基苯肼、硫酸苯肼等，形成黄色的腙而用于鉴别

甲酮基的呈色反应：与亚硝基铁氰化纳、间二硝基酚、芳香醛类反应呈色。与亚硝基铁氰化纳的反应是黄体酮灵敏、专属的鉴别反应，在一定反应条件下，黄体酮显蓝紫色。其他常用甾体激素均不显蓝紫色，或呈现淡橙色或不显色。 含量测定—四氮唑比色法：用于皮质激素类药物含量测定的方法，皮质激素类C17-a-醇酮基有还原性，可还原四氮唑盐成有色甲赞

第十一章 抗生素类药物的分析

特点：化学纯度较低 、活性组分易发生变异 、稳定性差 分析方法：理化方法 、生物学法

β–内酰胺类：包括青霉素类和头孢菌素类，都有一个游离羧基和酰胺侧链，活性中心：β–内酰胺环 鉴别反应：

1）羟肟酸铁反应：β–内酰胺类—NH2OH·HCl / NaOH —羟肟酸 —Fe3+ / H+ —显色 2）茚三酮反应：α-氨基 — 茚三酮 — 蓝紫色 3）双缩脲反应：β–内酰胺类—碱性酒石酸铜 — 紫色 4）光谱法（UV、NMR）

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