生物制药思考题(8)

与生物制药考试相关的一些思考题解答

CDR以外序列替换人 Ig分子中的序列，可基本消除免疫原性。改型抗体也称CDR移植抗体 。

3、镶面抗体：抗体可变区表面暴露的氨基酸残基位置和数量非常保守，不因种属和型别改变。为免疫原性主要来源，将鼠抗可变区表面暴露的骨架区氨基酸残基改为相应的人源残基，使可变区表面人源化。消除异源性，保持单抗特异性和亲和力。

4. 了解小分子抗体的种类。

小分子抗体种类：

1、Fab片断：完整轻链和重链Fd段（单价），完整抗体的1/3，木瓜蛋白酶水解抗体，重组方式生产，抗原特异性、制作简单

2、Fv与单链抗体

（1）Fv （可变区片断）：VL、VH非共价键结合（单价）；完整抗体的1/6；基因工程重组生产；易解离

（2）ScFv：常用连接肽：(Gly4Ser)3

3、单域抗体：VH或VL；；仍保留了抗原结合活性；亲和力低

4. 分子识别单位：单个 CDR区；亲和力相当低

5. 什么是抗体库技术？写出噬菌体抗体库技术的优点。

抗体库技术：克隆全套抗体重链和轻链可变区基因，重组到特定原核表达载体中，转化大肠杆菌表达有功能的抗体分子片断，通过亲和筛选得到特异性抗体可变区基因的技术。 噬菌体抗体库技术的优点：

1、能包含B细胞全部克隆，库容量大，可筛选到各种抗体

2、避开了人工免疫和杂交瘤技术，直接获得抗体基因

3、可获得高亲和力的人源化抗体

4、筛选得到的抗体更易于在大肠杆菌中表达

6. 噬菌体展示的基本原理，噬菌体展示过程中辅助噬菌体的作用。 原理：外源基因插入在特殊的质粒，即噬菌粒上，噬菌粒含质粒和噬菌体的复制起始点，但需要辅助噬菌体提供产生单链所必需的蛋白。噬菌体颗粒中单链DNA主要来自于带外源基因的噬菌粒。

作用：噬菌体的繁殖需要野生型P3、P8蛋白，也由辅助噬菌体提供，野生型的P3(或P8蛋白)和P3融合蛋白(或P8融合蛋白)共同组装到噬菌体颗粒的表面。

7. 了解噬菌体抗体库的构建与筛选过程。

噬菌体抗体库的构建：

1、扩增全套抗体可变区基因：从人外周血获取B细胞，提取B细胞mRNA，RT-PCR扩增全套抗体可变区基因。

2、构建合适的噬菌体表面展示载体：Fab抗体库展示载体；scFv抗体库展示载体

3、转化大肠杆菌

筛选过程：

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