生物制药思考题(3)

与生物制药考试相关的一些思考题解答

解，利于检测与纯化。

2、成功应用的融合担体蛋白：谷胱甘肽S-转移酶（GST）、麦芽糖结合蛋白（MBP）以及硫氧还蛋白（Trx）等。

3、融合表达一般都有方便的纯化方法（ GST 融合蛋白可采用谷胱甘肽-sepharose亲和柱进行纯化，带组氨酸标签的融合蛋白采用金属螯合层析纯化）。

缺点：对融合蛋白进行位点特异性裂解。

1、分裂不稳定性：工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌。

相关因素：（1）质粒的丢失率（宿主菌、质粒特性和培养条件）；

（2）含质粒菌与不含质粒菌的生长速度差异

2、结构不稳定：DNA从质粒上丢失、质粒上序列发生重排等。

缺点是什么？常用哪些试剂溶解包含体？包含体复性的方式有哪些？

包含体（Inclusion Body）：外源基因在大肠杆菌中高水平表达时通常形成的一种由目的蛋白构成的不溶的、无活性的蛋白聚集体。

包含体表达的优点：表达量高；密度高（1.2-1.4g/mL之间 ），容易分离；抗蛋白酶；对宿主毒性小。

包含体复性方法：稀释复性；透析复性；层析复性。

影响复性的操作参数：蛋白浓度、温度、pH、离子强度。

提高蛋白复性率的策略：复性添加剂如PEG、表面活性剂；分子伴侣

常用半胱氨酸之间形成二硫键方法：

1. 空气氧化法。在碱性条件下通空气，氧化时可以加入二价铜离子加快反应速度，能够取

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