免疫学基础(5)

肥大细胞和嗜碱性粒细胞 通常不表达高亲和性的Fc RⅠ当受到细胞因子IL-3,IL-5,GM-CSF,PAF激活后可表达,导致脱颗粒并释放生物活性介质.如阳离子蛋白,主要碱性蛋白,神经毒素等.这些物质可杀伤寄生虫和病原微生物,也可以引起组织细胞损伤.

巨噬细胞,树突状细胞等抗原提呈细胞也能表达Ⅱ,该受体亲和力低,稳定性差,其降解产物IgE-BF或可溶性CD23参与IgE的调节.

Ⅰ型超敏反应的发生过程

生物活性物质的作用方式

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三、Ⅰ型超敏反应的常见疾病 （一）过敏性休克 1. 药物过敏性休克

药物： 青霉素(最常见)、普鲁卡因、利多卡因、链霉素、磺胺、有机碘等。

机制： 青霉素 青霉噻唑醛酸和青霉烯酸与人体组织蛋白结合(完全抗原)产生特异性IgE过敏性休克

2.血清过敏性休克:多肽及蛋白质制剂：抗毒素血清（如白喉、破伤风外毒素）、疫苗、抗蛇毒制品、细胞因子等生物制剂。

（二） 呼吸道过敏反应

过敏原：尘土、花粉、霉菌、动物皮屑或呼吸道感染等。 常见病：过敏性鼻炎和过敏性哮喘。 （三） 消化道过敏反应

过敏原：鱼、虾、蛋、奶及一些药物 常见病：过敏性胃肠炎 （四）皮肤过敏反应

过敏原：多种抗原，或冷热刺激、光照射、肠内寄生虫感染等。 常见病：荨麻疹、湿疹、皮炎、神经血管性水肿。 防治原则：

a.变应原的皮肤试验青霉素.花粉等,查找变应原，避免再接触。b.异种免疫血清的脱敏疗法。c.特异性变应原脱敏疗法。d.药物防治。

Ⅱ型超敏反应

Ⅱ型超敏反应发生的条件：

a.感染和理化因素所致改变的自身抗原。b.同种异型抗原进入机体(ABO血型抗原Rh抗原和LHA抗原)。c.结合在自身组织细胞表面的药物或药物和抗体的复合物。d.外源性抗原与正常组织细胞之间有共同抗原。

Ⅱ型超敏反应损伤机制

通过激活补体传统途径或通过补体裂解产物C3b介导的调理作用,使靶细胞溶解破坏IgG抗体与靶细胞特异性结合后,通过其Fc段与巨噬细胞,NK细胞表面相应受体结合,通过调理吞噬和ADCC作用使靶细胞破坏抗细胞表面受体的自抗体与相应受体结合后可导致细胞功能紊乱,表现为对靶细胞的刺激作用

临床常见的Ⅱ型超敏反应性疾病

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a.输血反应,血型不符的输血。b.新生儿溶血症,母子间Rh血型不符。c.自身免疫性溶血性贫血,自身红细胞抗体。d.药物过敏性血细胞减少症,青霉素.磺胺等。e.甲状腺机能亢进(Ⅱ型特殊型)甲状腺刺激素受体的抗体。

Ⅲ型超敏反应

Ⅱ型超敏反应发生的条件：

a.有变应原(持续的病原微生物感染,自身抗原长期存在)并产生特异性IgG IgM及IgA抗体。b.中等大小可溶性免疫复合物形成并沉积于局部或全身毛细血管基底膜。c.通过激活补体和在血小板嗜碱性及嗜中性粒细胞参与下,引起以充血水肿局部坏死和中性粒细胞浸润为主要特征的炎症反应和组织损伤。

临床常见的Ⅲ型超敏反应性疾病：【P303】 Ⅲ型超敏反应的防治原则：

a.切断微生物感染,减少中等大小免疫复合物的形成。b.减少低亲和力抗体的产生 c.通过血浆过滤除去中等大小的可溶性免疫复合物

Ⅳ型超敏反应

此型超敏反应发生与抗体和补体无关,而与效应T细胞和吞噬细胞及其产生的细胞因子有关，反应发生慢,通常需经24~72小时方可出现炎症反应,又称迟发型超敏反应。引起以单个核细胞浸润和组织细胞损伤为主的炎症反应

临床常见的Ⅳ型超敏反应性疾病：

a.传染性迟发型超敏反应,胞内寄生菌.病毒的感染过程中发生的超敏反应。b.接触性皮炎,药物.农药等刺激皮肤。c.移植排斥反应。

第九章 免疫标记技术

标记抗体技术是在抗体球蛋白分子上，连接某一个特定的、容易检测的分子或原子 (标记物)，利用标记抗体能与相应抗原结合的特性，通过标记物的检测，从而确定抗原的存在部位。标记抗体技术目前广泛应用的主要有荧光抗体、酶标记抗体和同位素标记抗体等。前二者主要用于抗原定位，而后者不仅可用于定性、定量，还可用于定位。此外尚有铁蛋白标记抗体，主要用于免疫电镜的技术，在亚细胞水平上进行抗原定位。

一、荧光抗体技术

将荧光染料连接在提纯的抗体球蛋白分子上，这种用荧光染料标记的抗体，就叫荧光抗体。一种物质受到短波光线 (如紫外线、蓝紫光)激发后，能放出波长比激发光长的可见光，此种光称为荧光染料，抗体经过荧光染料标记后，并不影响其与抗原结合的能力和特异性。因此，当荧光抗体与相应的抗原结合时，就形成带有荧光性的抗原抗体复合物，从而可在荧光显微镜下检出。

二、免疫酶技术 免疫组化法：用酶代替荧光素标识抗体作生物组织中抗原的鉴定和定位，称为免疫组化法。 酶联免疫吸附测定（ELISA）：用于可溶性抗原或抗体的定量，是一种既特异又敏感的方法。 用于标记的酶有辣根过氧化物酶（HRP）、葡萄糖氧化酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和B-半乳糖苷酶等。其中以HRP应用最广。

HRP的作用底物为过氧化氢，催化时需要供氢体，无色的供氢体氧化后生成有色产物，从而使不可见的抗原抗体反应转化为可见的呈色反应。

(一)免疫酶组化染色法 酶抗体染色法和荧光抗体染色一样，主要有直接法、间接法两种。直接法系用酶标记抗体直接染色，间接法则先用抗血清处理，再用酶标记的抗抗体染色。

酶标记抗体染色通常用冰冻切片，亦可用石蜡切片，用PBS洗净，用直接法或间接法染色，洗去酶标识抗体后，滴加基质反应液显色。常用的反应液为3，3`-二氨基联苯胺(DAB)溶液 (0.05%于pH2.6Tris盐酸缓冲液中，临用时加入0.02毫升l%H2O2)，洗净后即可在光学显微镜下观察。抗原所在部位呈黄褐。

如又用苏木精-伊红对比染色，则细胞核呈紫色，与黄褐色的抗原对此明显，效果较好。本

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法与荧光抗体技术相比，它不需要特殊的荧光显微镜，且形态结构看得清楚，定位比较精确。酶标片子可长期保存，有利于对结果作反复对比，不象荧光抗体片子只能短时间保存。由于酶促反应的产物能产生电子密度的改变，这样就可进一步用电镜作亚细胞结构的定位观察，从而将光学显微水平和电子显微水平衔接起来。

(二)酶联免疫吸附测定(ELISA) 是当前应用最广、发展最快的一项新技术。其基本过程是将抗原或抗体吸附于固相载体，在载体上进行免疫酶试验，底物显色后，用肉眼或分光光度计判定结果。

1.抗原(或抗体)包被:包被的蛋白质浓度通常为1～10ug/ml，应通过实验选择，最适浓度按所需浓度溶于包被液 (PH9.6，0.05molNa2CO3缓冲液)加入聚苯乙烯滴定板的平底小孔内，4℃过夜，用含助溶剂吐温20(0.05%)的PBS洗涤3次。

2.吸附试验:先加入与包被抗体 (或抗原)相对应的被检物，吸附后充分洗涤，再加入与被检物对应的抗抗体 (或其他对应物)，再洗涤，这样可以多层次的叠加，但最后一层必须连接酶，以便与底物作用显色，吸附试验的方法主要有以下几种。

(1)间接法，用于测定抗体。先将抗原被覆，洗涤后加待检血清，充分漂洗后加入酶标记的抗抗体，洗后即可供显色观察。

(2)夹心法，先用抗体 (IgG)被覆，加待检抗原，作用洗涤后，加酶标记抗体。

(3)竞争法:用抗体被覆，加一定量的标记抗原和待检抗原混合物，二者竞争与板上的抗体结合，显色后与加未标记抗原的对照组比较，试验孔颜色显著低于对照孔者为阳性孔，待检抗原含量越高，颜色越浅，此法适于小分子抗原或半抗原的检测。

（4）双夹心法，先将抗体被覆，第二层是待检抗原，洗后加酶标记抗抗体。但第三层抗体必须不同于用于被覆的抗体，以避免假阳性。本法适于检查大分子抗原。

(5)酶抗酶抗体法 将抗原吸附于载体上，然后加待检抗血清，第三层加抗抗体，第四层是抗酶抗体，第五层是酶。其中第二层的抗血清与第四层抗酶抗体必须是同一制备的。这样就可以利用抗抗体搭桥，它的二只手，一手拉住待检抗体，一手拉住抗酶抗体。此法不需事先标记酶，且可事先准备好酶-抗酶抗体复合物，为其优点。

3底物显色，与免疫酶组化染色法不同，必须用反应后能形成水溶溶性色素的供氢体，常用的有邻苯二胺 (CPD)，联苯茴香胺，5-氨基水杨酸和邻联甲苯胺 。于用前配制避光保存，加入反应孔作用20～30min，反应结束，加浓硫酸或浓碱液中止反应。

4结果判定 在白色背景上，用肉眼观察，每批试验均需有阴性对照。颜色反应明显深于对照组者判为阳性。亦可用分光光度计测定，待检孔OD值 (P)与对照孔OD值 (N)的比值 (P/N)大于1.5或2.0者为阳性。

三、放射免疫测定 (RIA) 四、免疫印迹法

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