利用蚕豆根细胞微核技术检测洗发水的毒性

利用蚕豆根细胞微核技术检测洗发水的毒性

姓名：赵云霞 同组者：严彩芳、辛芝红、刘丽丽、李薇薇等 （生物系 生物科学112班 学号：2011131229 指导老师:郝雪峰) 摘 要 用蚕豆根尖细胞微核技术，以微核千分率作为指标，研究洗发水对蚕豆根尖细胞的遗传毒性效应。洗发水对蚕豆根尖进行污染处理后，通过观察微核的形态，记录微核的数目，测定蚕豆根尖细胞的微核率，并且在实验中以未经污染处理的蚕豆根尖作为对照，来比较测定该洗发水的毒性.通过染色制片观察，我们发现洗发水能够诱发较高频率的微核,还能诱导染色体产生多种类型的染色体畸变。进而得出结论：洗发水具有一定的遗传毒性,对植物根尖细胞具有明显的致畸效应。

关 键 词 蚕豆 洗发水 微核 染色体畸变

Abstract With the micronucleus technique, the micronucleus permillage as the index, genetic toxicity effects of shampoo on broad bean root tip cells. Shampoo for pollution treatment on root tip, broad bean through the observation of micronucleus form, record the number of micronuclei, micronucleus test of bread bean root tip cell rate, and in the experiment without pollution treatment of bread bean root tip as control group, to compare the toxicity determination of shampoo. Through dyeing production observation, we found that the shampoo can induce

micronuclei frequency higher, chromosome aberration can lead to various types of chromosome. Then draws the conclusion: shampoo with certain genetic toxicity, has obvious teratogenic effect on plant root tip cells.[1] keywords broad bean shampoo micronucleus chromosomal aberrations

引 言 微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。其折光率及细胞化学反应性质和主核一样，具有合成DNA的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的，但是已有实验证明，整条染色体或几条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在有丝分裂过程中行动滞后，在分裂末期未能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。[1]

蚕豆根尖细胞微核试验(MC-NT)技术是一种以染色体断裂及纺锤丝损伤为测试终点的植物微核检测方法。它是一种应用于监测环境致突变物对人体和其他生物体的遗传物质产生危害的技术,并从细胞遗传学水平上探讨植物遗传物质的改变状况与环境污染，也可以检测淡水环境的质量。[2] 1. 实验目的

掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。并利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗发水的毒性状况给出客观的评价，同时表明蚕豆

根尖细胞MCN对胁迫很敏感，蚕豆根尖微核技术可用于洗漱用品的安全监测。 2. 材料与方法 2.1 实验材料

蚕豆种子、洗发水、显微镜、镊子、培养皿、剪刀、载玻片、盖玻片、烧杯、卡诺氏固定液、盐酸酒精解离液、改良苯酚品红染液、NaN3、纱布等。 2.2 毒液配制

选取所测洗发水，按平时所用比例与水混合均匀。 2.3实验方法 2.3.1 浸种

择饱满、均匀的20粒种子，洗净后用蒸馏水常规浸种24h，此期至少换水2次；待种子充分吸胀后，移入干净的培养皿内培养。 2.3.2 催芽

待种子吸胀后，用潮湿的纱布松散包裹置于盆中，纱布上载盖一层湿水的毛巾，催芽约1—2天。 2.3.3 被检测液处理根尖

各取10粒，分别用蒸馏水（自来水）和毒液培养种子1天。 2.3.4 根尖细胞恢复培养

处理后的种子用蒸馏水（自来水）浸洗3次，每次2～3 min；将处理液洗净后，置于干净培养皿恢复22～24h；同时均设蒸馏水处理为空白对照组。以上各步操作温度均在25℃下进行。 2.3.5 根尖细胞固定

将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm左右长的幼根，用卡诺氏液固定5～6h。 2.3.6 酸解

用蒸馏水浸洗固定好的幼根3次，每次5min，吸净蒸馏水，加入盐酸酒精解离液酸解10min，幼根软化即可。 2.3.7染色

吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1～2分钟。最后浸于水中。制片前取出置载玻片上，截下1～2mm左右长的根尖，滴1-2滴改良苯酚品红染液染色20min，之后方可压片观察。 2.3.8 压片观察

对处理的根尖分生组织进行常规压片，每个处理各取3个根尖压片。在高倍镜下观察压片根尖分生区细胞分散良好的区域，并统计不少于1000个细胞中的微核数，然后再统计算出每个根尖的MCN‰。[4] 3. 结果

3.1标准规定[3]

对于蚕豆微核实验中微核千分率的计算可采用以下公式： MCN‰=某测试样点（或对照组）观察到的MCN数／某测试样点（或对照组）观察到的细胞数×1000‰

污染指数（PI）=

样品实测微核千分率平均值

标准水（对照组）微核千分率平均值根据《全国生物技术监测规范—蚕豆根尖微核技术》规定的污染指数划分标准，采用污染指数（PI）值来划分受污染程度。此方法可避免因实验条件等因素带来的MCN‰本底的波动，标准见表1[4] 。凡数值在上、下限时定为上一级污染。

表1 污染指数PI值评价水质标准表

Table1 Pollution Index for evaluation of water quality standards value

of PI table

污染指数PI值 水质污染等级 0 ～ 1.5 基本无污染 1.5 ～ 2.0 轻污染 2.0 ～ 3.5 中污染 3.5以上 重污染

表2 诱变剂诱发蚕豆根尖细胞产生微核统计表

实验组 根尖 1 微核数(个3 3 2 1 2 1 2 3 1 2 3 对照组 /1000) MCN‰ 污染指2.0 数 污染等轻污染 级 毒性 由表可知：被老姜王洗发露污染的根尖MCN%为2.667，污染指数

轻微有毒 — — — 2.667 1.333

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