乳酸菌的分离与发酵09级4班2组2(2)

很好的,实用

分离纯化培养基： 脱脂乳平板培养基 鉴定培养基：脱脂乳试管

其他：脱脂乳粉或脱脂牛奶，蔗糖等

3）仪器及用具 恒温培养箱，高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，培养皿，试管，

三角瓶若干 2. 培养条件 培养温度：40℃

厌氧条件：由于乳酸菌的发酵与分离纯化都需要厌氧条件，而实验室没有专门的厌氧培养箱，所以我们采用在培养皿和发酵杯上套上保鲜膜制造无氧环境。

培养时间：在培养基上分离培养的时间为2天左右，酸乳发酵为12个小时左右

方法和步骤

1）乳酸菌的分离纯化

(1)分离。取市售新鲜酸乳或泡菜的酸液稀释10~10

4

5

1

5

，取其中的

10、102个稀释度的稀释液各0.1~0.2mL，分别接入脱脂乳琼脂培养基上，

用无菌玻璃刮铲依次涂布，或者直接用接种环沾取原液，平板划线分离，置40℃下培养48h，如出现圆形稍扁平的淡黄色菌落及其周围培养基变为黄色者，可初步定为乳酸菌。

(2)鉴别。选取乳酸菌典型菌落转至脱脂乳试管中，40℃培养8~24h。若牛乳出现凝固，无气泡，呈酸性，涂片镜检细胞呈杆状或链球状(两种形状的菌种均分别选入)，革兰氏染色阳性，则可将其接种到试管斜面上连续传代4~6次，最终选择出在3~6h能凝固的牛乳管，作菌种待用。

2）乳酸菌饮料—酸乳的发酵

(1)将全脂乳粉和水按质量比为1：(7—10)混匀，或将新鲜牛奶灭菌后，加入质量分数为5％、6％的蔗糖，充分混合，于80~85℃灭菌10—15min，然后冷却至35~40℃，备用。

(2)将分离到的嗜热乳链球菌、保加利亚乳杆菌及两种菌的等量混合菌用接种环蘸去加入调配好的已经灭菌的一次性塑料杯子中，搅拌匀，随后用保鲜膜封住杯口。

(3)将接种后的酸乳瓶置于40~42℃恒温箱中培养3~4h。培养时注意观察，在出现凝乳后停止培养。再转入4~5℃的低温下冷藏24h以上进行成熟。

(4)以品尝为标准评定酸乳质量，将用乳酸球菌和乳酸杆菌等量混合发酵的酸乳与单菌株发酵的酸乳相比较，前者的香味和口感更佳。品尝时若出现异味，表明酸乳受杂菌污染了。

二、实验实际操作结果 1.平板画线分离结果

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