毕福钧,RRLC法与HPLC法在红参和西洋参人参皂苷含量测定中的分析(2)

红参和西洋参人参皂苷含量测定中的分析比较

效率,所以建立一个快速测定人参皂苷Rg1、Re和

Rb1含量的方法,对于药品检验分析具有重要的意义。本文旨在采用MerckC18整体柱替代常规C18色谱柱的高效液相色谱法和超高速液相色谱法快速测定红参和西洋参中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的含量,并比较3种方法在系统适用性和人参皂苷含量测定结果中的差异。

1 仪器与试药

Agilent1200高效液相色谱仪和Agilent1200SL超高速液相色谱仪(美国安捷伦公司)。

人参皂苷Rg1(批号110703-200424)、人参皂苷Re(批号110754-200320)和人参皂苷Rb1(批号110704-200318)均由中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用;红参和西洋参样品均为市场商品,由广州市药品检验所中药室刘柏英老师鉴定;乙腈为色谱纯,甲醇、正丁醇为分析纯,水为超纯水。2 红参中人参皂苷Rg1、Re和Rb1含量测定2 1 对照品溶液的制备按中国药典方法,精密称取对照品人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1适量,加甲醇制成每1mL分别含0 5mg、0 3mg、0 5mg的混合溶液,摇匀,即得。2 2 供试品溶液的制备

按中国药典方法

[1][1]

相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0~9min,19%

A;9~12min,19%A 29%A;12~13min,29%A;13~20min,29%A 40%A),流速1 0mL min,检测波长203nm,柱温25#,进样量2 5 L。2 5 系统适用性试验在上述3种色谱条件下,理论板数按人参皂苷Rg1峰计,均不低于6000,人参皂苷Rg1与人参皂苷Re以及人参皂苷Rb1与相邻组分色谱峰均达到完全分离,分离度大于1 5。表明3根色谱柱在上述各自的色谱条件下均可用于红参中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的含量测定,结果见图1、表1。2 6 重复性试验

精密称取同一批(0807)样品6份,

每份约1g,照 2 2%项下方法制备供试品溶液,按 2 3%项下条件二进样测定。结果人参皂苷Rg1+Re的平均含量为0 58%,RSD=2 8%;人参皂苷Rb1的平均含量为0 61%,RSD=2 0%。按 2 4%项下条件测定,人参皂苷Rg1+Re的平均含量为0 56%,RSD=2 3%;人参皂苷Rb1的平均含量为0 62%,RSD=2 5%。结果表明2种色谱条件下的重复性良好。2 7 样品含量测定按 2 2%项下方法制备供试品溶液,分别按 2 3%、 2 4%项下色谱条件进样测定,以外标法计算红参样品中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1含量,结果见表2。表明3根色谱柱在上述各自的色谱条件下测得红参中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的含量结果差异很小,但MerckC18(100mm 4 6mm,2 m)整体柱和AgilentZorbaxEclipseXDB-C18(50mm 4 6mm,1 8 m)色谱柱的分析时间较常规液相色谱柱明显缩短。3 西洋参中人参皂苷Rg1、Re和Rb1含量3 1 对照品溶液的制备 按中国药典方法,精密称取对照品人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1适量,加甲醇制成每1mL含人参皂苷Rg10 1mg、人参皂苷Re0 4mg、人参皂苷Rb11mg的溶液,即得。3 2 供试品溶液的制备 按中国药典方法

[1][1]

-1

,取

本品粉末(过4号筛)约1g,精密称定,置索氏提取器中,加三氯甲烷约100mL,加热回流3h,弃去三

氯甲烷液,药渣挥干溶剂,连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中,精密加入水饱和正丁醇50mL,密塞,放置过夜,超声(250W,40kHz)处理30min,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液25mL,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2 3 HPLC色谱条件条件一:采用DiamonsilC18(200mm 4 6mm,5 m)色谱柱,流动相为乙腈(A)-水(B)

[1]

,梯度洗脱(0~35min,19%A;35~

55min,19%A 29%A;55~70min,29%A;70~

[1]-1

100min,29%A 40%A),流速1 0mL min,检测波长203nm,柱温30#,进样量10 L。条件二:采用MerckC18(100mm 4 6mm,2 m)整体柱,流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0~6min,16%A;6~8min,16%A 19%A;8~16min,19%A;16~20min,19%A 29%A;20~25min,29%A;25~30min,29%A 40%A),流速1 0mL min,检测波长203nm,柱温25#,进样量10 L。2 4 RRLC色谱条件

采用AgilentZorbaxEclipse

XDB-C18(50mm 4 6mm,1 8 m)色谱柱,流动

-1

[1]

,取

本品粉末(过3号筛)约1g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入水饱和的正丁醇50mL,称定重量,置

水浴中加热回流提取1 5h,放冷,再称定重量,用水饱和正丁醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液25mL,置蒸发皿中,蒸干,残渣加50%甲醇适量使溶解,并转移至10mL量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

3 3 HPLC色谱条件 条件一:采用DiamonsilC18(200mm 4 6mm,5 m)色谱柱,流动相为乙腈

[1]

(A)-0 1%磷酸溶液(B),梯度洗脱(0~44min,

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