流式细胞仪的原理和临床应用(4)

52现代医学仪器与应用2008年第20卷第1期

ModeicalEquipmolentandApplicationFeb．2008．V

20．No．1

色(17种)的荧光分析对细胞亚群的识别、细胞功能评价等更为精确1191。应用多色流式细胞仪可同时检测多个标记分子，减少试剂的重复使用、所需样本量以及分析时间。从而降低检测成本。多色荧光分析是流式细胞技术发展的必然趋势。

．3．4

CBA技术的应用

从传统意义上讲，流式细胞技术只能分析细胞及其成分。不能分析液体中的可溶性成分。然而，如果将液体中的可溶性成分结合在一种类似于细胞大小的颗粒(如乳胶颗粒)上，流式细胞仪便可对其进行分析。这就是近年才发展起来的流式微球分析(cytomet．

ticbead

assay，CBA)技术。CBA的工作原理是将不同

捕获抗体包被在不同荧光强度的微球上形成捕获微球，和待测样品溶液混合后，微球上的特异性抗体就与样品(血清、血浆或细胞培养液)中相应的抗原或蛋白结合，再加入荧光标记的检测抗体，形成“三明治”夹心复合物，用流式细胞仪进行检测，微球上结合的待测抗原或抗体分子数量与其荧光强度呈线性关系，由此可对待测液体中与微球上包被抗原或抗体分子相对应的成分进行定性或定量分析。

CBA是集ELISA和细胞流式技术优点为一身的液相蛋白分析系统。CBA的每一种微球提供一种蛋白的捕获表面，捕获微球与待测样品结合后呈悬浮态，与ELISA相比。能更有效地捕获被分析物；CBA具有FCM的宽范围荧光检测特点，对样本需求量更少，检测更快速、准确。当前已经有越来越多的科研工作者和临床研究人员将CBA应用于他们的研究和检测。CBA可以帮助我们检测微量样本(血液、眼泪、血清、唾液等)中的细胞因子，检测血浆中炎症因子的水平，检测细胞中信号传导通道蛋白，检测细胞凋亡相关蛋白。监控各种类型的抗体，进行肿瘤研究，检测药物对病人的治疗效果，进行SLE和新生儿脓血症等疾病的监控检测，进行药物研发，进行疫苗研究及总体免疫

功能分析嗍。

3．5流式分子表型分析

流式分子表型分析(molecularphenotyping)是指用流式细胞技术检测细胞中特异性核酸序列或特异性基因异常。流式分子表型分析与免疫表型分析技术相结合，对于检测所选择细胞亚群的特异性核酸序列

如癌基因病毒核酸等提供了一种非常有用的工具，具有广阔的应用前景。流式分子表型与免疫表型结合分

析的基本技术路线是：①待测细胞首先与特异性细胞亚群的单克隆抗体反应；②固定并渗透细胞；③通过PCR进行引物特异的核酸序列扩增；④应用对扩增产

物的特异性寡核苷酸荧光素标记探针进行荧光原位

杂交(FISH)；⑤加入针对细胞亚群单抗的荧光素标记的第二抗体；⑥流式细胞仪检测及数据分析。例如，流

式细胞免疫表型与聚合酶链反应及荧光原位杂交(PCR—FISH)法结合测定血液CD4+细胞中HIV特异的DNA或RNA，对AIDS的病程监测、治疗反应及预后等有重要价值。流式荧光原位杂交(Flow—FISH)法测定染色体端粒长度：细胞的染色体端粒是由2—20

kb

串联的短片段重复序列(TrAGGG)n和一些结合蛋白组成，端粒长度越长，所含重复碱基数目越多；用荧光素标记的核酸一(CCCTAA)3端粒序列特异性探针进行FISH后经流式细胞仪检测，其荧光强度的大小可反映端粒的长短：Flow—FISH可测出<3kb的端粒长度差．对肿瘤的发生与发展、治疗与预后等研究有一定的价值【捌。

3．6分析软件的改进

流式检测结果的数据分析不是一个简单的工作，区分正常和病理细胞表型需要丰富的经验和专业知识。数据分析是最困难也是最耗时的。另外，没有标准化，结果是高度变异的。所以，开发更好的分析软件不仅使得复杂的数据分析更为便捷，也使得分析结果具有更好的一致性渊。

流式细胞技术具有操作简便、分析快速、客观、精确等优点．作为临床实验室的尖端检测技术被广泛应用。当前流式细胞分析已成为临床检验医学发展的一个热点。相信随着FCM新试剂、新方法韵不断开发和利用，FCM的应用领域将会越来越宽广。

参考文献

【l】左连富．流式细胞术与生物医学[M】．沈阳：辽宁人民出版

社，1996：129-422．

[2】沈关心，周汝麟．现代免疫学实验技术[M】．武汉：湖北科学

技术出版社，2002：226—230．3】Graeves

MF，Janos

syG，PetoJ，KayH

．Immunologicalde—

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