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流式细胞仪的原理和临床应用(2)

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以定量的良好手段,比传统的溶血试验具有更高的特异性和灵敏度问。

2.1.3在抗血小板抗体、抗中性粒细胞抗体、抗淋巴细胞抗体分析方面的应用

FCM测量血清和细胞

上相关抗体的方法不断被用于抗血小板、抗白细胞、抗淋巴细胞抗体的分析。测量的原理类似于间接、直接的Coombs试验。间接法是将病人血清与对照正常人血小板一起孵育后:与标记荧光的抗人球蛋白混匀、结合,再放入流式细胞仪进行荧光分析;直接法是将病人血小板与荧光标记的抗人球蛋白反应后进行测量,其敏感度高于间接法。抗血小板自身抗体如PAIgG、PAIgA、PAIgM等的产生可引起严重的血小板减少.这类疾病包括原发性或药物诱导产生的血小板减少、自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮[71。用流式细胞仪测定此类抗体简便快捷,可同时了解多个参数,更直观地显示抗体在血小板中的总体分布比例。

2.1.4在网织红细胞方面的应用

网织红细胞浆

内含有一定量的RNA,经染色后可显示网织结构,且其形式与RNA含量有关。流式细胞仪检测网织红细胞的胞浆所含的RNA物质的量的多少.可将网织红细胞分成三群,即早期网织红细胞(HFR)、中期网织红细胞(MFR)和晚期网织红细胞(LFR)。其中,HFR反映的是幼稚的网织红细胞罔。这三者的检测结果,表示的是各自占网织红细胞的百分比.这三型网织红细胞比例的

变化有以下五个临床意义:①贫血的诊断和鉴别诊断;②贫血的疗效观察;③在肿瘤治疗(放疗、化疗、移植)过程中,了解骨髓内造血状态;④骨髓移植后的早期监

测指标.是评价贫血药物疗效的一个重要和敏感的指

标;⑤网织红细胞生成指数监测肾移植后红细胞生成

活性比网织红细胞计数更敏感研。

2.1.5在造血干细胞移植中的应用

造血干细胞

移植加强烈化疗是治愈某些难治疾病的有效方法。骨髓移植(BMT)或外周血造血干细胞移植(PBSCT)的成功与否,除与是否合并并发症有关外,移植物中CD34+细胞的数量和质量是能否快速成功植活的重要因素。随着近年来外周血造血干细胞移植病例的日益增多,外周血造血干细胞的流式准确定量越来越成为关键问题。1995年,血液病治疗及移植国际联合会成立了干细胞绝对计

(Enumeration)dx组,致力于寻求

一种简单、快速、灵敏的流式细胞仪检测方法去定量外周血中造血干细胞的数量。这一方法对于临床实验室中不同的流式细胞仪都有效,而且在不同的移植中心具有可比性。这一方案即为1996年问世的ISHAGE方案,迄今为止,其他各种改进方案均是以此方案为基础的。精确测定CD34对于判断移植后的植活和选择G—CSF动员外周血造血干细胞的采集时间有着重要的指导意义【111。

2.1.6血小板功能的检测

血小板膜糖蛋白(GP)

是参与止血、血栓形成的重要分子基础.这些膜糖蛋白是一类重要的黏附分子。利用针对GP的单克隆抗体对血小板进行免疫荧光标记.并用流式细胞仪分析单个血小板或血小板亚群的GP是血小板膜糖蛋白检测分析方法的重大发展。其方法简便、快速、标本用量少、灵敏度高、结果准确。与血小板有关的抗原的临床意义有

以下两点。①诊断遗传性血小板功能缺陷疾病,如GP

Ib,Ⅸ复合物先天缺陷导致巨大血小板综合征;GPITb/

Ⅲa复合物先天缺陷导致血小板无力症【llJ。②血栓性疾

病和血栓前状态,活化血小板的检测。由于活化血小板是血栓的主要成分之一.也是引起血栓形成的主要原因,所以血小板活化程度增高与疾病发生发展有关。如心绞痛和心肌梗死、冠状动脉血管成形术、脑动脉硬化病人活化血小板百分率和绝对数显著高于正常人【¨切。

2.2在临床免疫中的应用

淋巴细胞亚群的测定:淋巴细胞分为T淋巴细胞(CD3)、B淋巴细胞(CDl9)和NK细胞(CDl6+56)__=大群。T淋巴细胞又分为辅助性T细胞(CD4)、细胞毒性T细胞(CD8)。流式细胞术检测T淋巴细胞和B淋巴细胞百分数可以用来判断某些免疫缺陷和自身免疫性疾病。CD4+和CD8q'淋巴细胞的百分数有助于监测

患有免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病或有免疫反应的病人的免疫状态。正常人T淋巴细胞CD4+,CD8+比值大约为2/1,比值升高表明机体免疫机能亢进,见于自身免疫性疾病,如SLE、类风湿性关节炎、自身免疫性溶血等;比值降低表明机体免疫机能下降.如艾滋病、病毒感染、肿瘤、活动性肝硬化、AA等旧。当人体感染HIV后,CD4CF淋巴细胞的百分比和数量减低。可辅助HIV监控治疗。若比值<0.2,应停用免疫抑制剂,以免发生感染而导致移植失败。CDl9与机体免疫球蛋白

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