流式细胞仪的原理和临床应用

现代医学仪器与应用2008年第20卷第1期ModeicalEquipmentandApplication

Feb．2008．Vol20．No．1

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流式细胞仪的原理和临床应用

沈二霞

流式细胞术(flowcytometry，FCM)是利用流式细胞仪对细胞等生物粒子的理、化及生物特性进行分析的方法。它是上个世纪70年代初发展起来的一项高新技术。80年代初研制出了性能稳定良好的流式细胞仪，并开始被应用到临床医学研究及疾病的诊断和监测。流式细胞仪具有检测速度快、测量指标多、采集数据量大、分析全面、方法灵活等特点。近年来，随着流式细胞仪性能的不断改进和测定方法与技术的快速发展，流式细胞术成为常规实验诊断的重要手段，一些检验项目已成为临床疾病诊断、治疗方案选择、预后判断等不可或缺的内容…。

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流式细胞仪的构成及工作原理

流式细胞仪主要由液流系统、光学系统、电子系

统、分析系统和细胞分选系统五个部分组成。将待测细胞制成单细胞悬液。经荧光染料染色后加入样品管，在一定气体压力下待测样品被压人流动室。待测细胞在鞘液的包裹下单行排列，依次通过检测区，被荧光染料染色的细胞受到强烈的激光照射后，产生散射光和荧光信号。这两种信号同时被前向光电二极管

和90o方向的光电倍增管(PMT)接收。散射光分为前

向角散射(forwardscatter，FSC)和侧向角散射(sidescatter，SSC)。前者主要反映被测细胞的大小，后者主要反映被测细胞的胞质、胞膜、核膜的折射等，以及细胞内颗粒的性状。光信号通过波长选择通透性滤片后，经光电倍增管接收后转为电信号，再经数／模转换器转换为可被计算机识别的数学信号。以一维直方图或二维点阵图及数据表或三维图形显示出来fl,21。

流式细胞仪还可以对分析中的目的细胞进行分选，它是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。流动室的喷嘴上安装有超高频的压电晶体。可以产生高频

作者单位：中山大学中山医学院免疫学教研室，广东，广州510080综述

振荡，使液流断裂为均匀的液滴，待测细胞就包含在液滴之中。将这些液滴充上正或负电荷，当带电液滴通过电场，便会在电场的作用下发生偏转，然后落人相应的收集器中，从而实现细胞分选[21。2临床应用

2．1在血液中的应用

由于血液、骨髓标本采集比较方便，样品中各成分呈分散悬浮状态，易于流式细胞仪的分析、分选等。因而血液学是流式细胞术技术首先和重要的应用领域。以下是流式细胞仪在血液学中的应用。

2．1．1白血病的免疫分型

白血病的免疫分型对

白血病的诊断、制订治疗策略、判断预后及发病机制的研究都有重要的参考价值刚。FCM检测白血病免疫

表型是利用荧光标记的单克隆抗体用分子探针多参

数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，可快速、精确分析白血病细胞，且重复性好。

其免疫分型的价值体现在：①能正确区别AML和ALL，并能进一步区别ALL中的T系、B系及亚型；②能正确鉴别AML中的M0、M6、M7；③能诊断双系或双表型白血病；④能发现仅表达个别次要非本系列相关抗原的白血病；⑤能诊断少见、疑难的白血病(如毛细胞性白血病)；⑥微小残留病变的FCM检测对

AML、ALL病人具有重要的预后意义，它可指导l临床治疗．预测白血病复发，评价自体骨髓移植的净化效

，

果阁。

2．1．2阵发性睡眠性血红蛋白尿的诊断根据CD59表达将阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)病人分为三型，研究证明不同亚型对补体的敏感程度不同。特异地分析网织红细胞的CD59的表达。对于PNH的诊断及病情评估有非常重要的意义。用流式细胞仪检测并计

缺乏这类膜蛋白的异常血细胞．

是目前诊断PNH最直接、最敏感、特异性最强且可

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