2型糖尿病患者尿足细胞的排泄及其相关因素
【摘要】目的 观测2型糖尿病（T2DM）患者尿中足细胞数量的变化，并探讨其相关因素。方法 选取124例T2DM患者和25例健康体检者（正常对照组，NC组）。其中T2DM患者分为3组：正常蛋白尿组（NA组），微量白蛋白尿组（MA组），大量蛋白尿组（CP组），应用小鼠抗人肾小球足细胞特异性蛋白Podocalyxin（PCX）单克隆抗体，采用间接免疫荧光技术检测尿中PCX阳性染色细胞，计数尿足细胞数量。ELISA方法检测血清C反应蛋白（CRP）等指标。比较各组的尿中足细胞数量、血CRP水平。结果 与糖尿病正常蛋白尿组比较，微量白蛋白尿组、大量蛋白尿组的血CRP、尿足细胞数量均升高（P＜0.05）。结论 T2DM患者尿中足细胞数量与尿蛋白相关，并随着血CRP的升高而增加。
【关键词】糖尿病；足细胞；血C反应蛋白
1 资料与方法
1.1 一般资料 T2DM组：按照1999年WHO糖尿病诊断标准，收集我院2008～2010年门诊和住院的124例T2DM患者（内生肌酐清除率＞90 ml/min），除外合并糖尿病急性并发症、大血管并发症、妊娠、感染、应激、外伤、恶性肿瘤、其他可能的肾脏病，以及曾服用血管紧张素转换酶抑制剂、他汀类降脂药、噻唑烷二酮类药物者，空腹血糖＜7.0 mmol/L，餐后2 h血糖＜10.0 mmol/L，血压＜140/90 mm Hg。所有患者根据尿白蛋白排泄率（UAER）分为正常蛋白尿组（UAER ＜20 μg/min，NA组）38例，微量白蛋白尿组（UAER 20～200 μg/min，MA组）59例，大量蛋白尿组（UAER ＞200 μg/min，CP组）27例。25名健康体检者作为正常对照组（NC组）。
1.2 方法
1.2.1 主要试剂 小鼠抗人podocalyxin单克隆抗体，由美国密西根大学David B.Kershaw教授惠赠，FITC标记山羊抗小鼠抗体IgG购自北京中杉生物技术有限公司。
1.2.2 空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（P2HBG）、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、血肌酐（SCr）应用全自动生化仪进行检测；糖化血红蛋白（HbA1 c）测定采用金标法；UAER测定采用放免法；CRP检测采用免疫比浊法。
1.2.3 尿中足细胞观察及足细胞数量检测 采用间接免疫荧光法。主要步骤如下：取新鲜中段尿液100 ml，以1200 r/min离心5 min。弃上清，取80 μL尿沉渣甩片，室温干燥30 min。丙酮4℃固定10 min，自然干燥，以0.01PBS冲洗。置1%Triton-100 5 min，羊血清蛋白封闭，室温30 min。小鼠抗人Podocalyxin单克隆抗体体积比1：20稀释，4℃过夜。FITC荧光标记山羊抗小鼠IgG体积比1：75稀释，37℃孵育30 min。碘化丙啶染核，甘油封片。荧光显微镜下观察，绿色荧光波长580 nm；每份标本低倍镜观察全片，高倍镜下确认胞膜呈绿色、
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