《微生物学及实验》实验指导书(5)

(1) 倒平板培养基：将改良TJA培养基完全融化并冷却至45℃左右倒平板，冷凝待用。 (2) 分离纯化及活化: 用接种环分别在双歧杆菌、乳酸杆菌、乳酸球菌斜面上挑取少许菌株作平板划线分离。分离后，放37℃下培养以获得单菌落。

(3) 观察菌落特征：经2-3天培养，待菌落长成后，应仔细观察并区别不同类型的菌，注意是否有污染。

青春型双歧杆菌在培养基平板表面常呈现的形态菌落特征: 大小为2-3mm, 菌落中央呈隆起状，边缘整齐，半透明状，有浓郁的醋酸味，染色镜检为短杆状。

乳酸菌在BL培养基平板表面常呈现三种形态特征的菌落: ①扁平型菌落:大小为2-3mm,边缘不整齐，很薄，近似透明状，染色镜检为杆状；②半球状隆起菌落:大小为1-2mm,隆起成半球状，高约0.5mm，边缘整齐且四周可见酪蛋白水解透明圈，染色镜检为链球状；③礼帽形突起菌落:大小为1-2mm，边缘基本整齐，菌落中央呈隆起状，四周较薄，也有酪蛋白透明圈，染色镜检也呈链球状。

(4) 挑取少许具有上述菌落特征和菌株，分别接入装有50ml去脂TJA培养基的试管中，37℃下培养至出现混浊时停止作发酵剂用，如果需用量大可改用发酵罐培养。 2、实验流程及注意事项:

2.1 实验流程

辅助原料 发酵剂

↓ ↓

豆粕煮汁—→调配—→灌装—→高压灭菌—→混合接种—→发酵—→成品 2.2 注意事项

2.2.1煮汁时一定要控制在90--100℃，时间为1h，不时的搅拌，以免糊化。煮汁一定要细过滤。

2.2.2 双歧杆菌、乳酸杆菌、乳酸球菌的比例为：3:1:1，总接种量为3%。

2.2.3培养温度控制在37℃，当培养液出现混浊沉淀时，表明此时活菌数很高且大量产酸(此时pH值约4.0)，即可终止发酵。

2.2.4 选择优良的发酵剂是产品是否具有保健作用的关键，也是产品能否长期保存期的关键。

2.2.5 辅助原料按发酵培养基(生产发酵液)配方配制，现配现用以防污染；在发酵及传代中应避免杂菌污染。

2.2.6 实际生产时应按国家标准或行业和企业标准组织生产。

四、实验结果记录

将双歧杆菌口服液混菌发酵液发酵结果记录于下表中。 沉淀情况

活菌总数

pH 值

口感

口服初步感觉

六、思考题

1、在制备保健口服液时，应具备那些条件？ 2、在制备保健口服液时，应注意那些因素?

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第四部分 主要参考书

[1] 周群英，《微生物学及实验》第二版， 高等教育出版社 ,2001年。 [2] 周德庆，《微生物学实验教程》第二版，高等教育出版社 ,2002年。 [3] 沈萍，范秀容，《微生物学实验》第三版， 高等教育出版社 ,2002年。 [4] 黄秀梨，《微生物学实验指导》，高等教育出版社 ,1999 年。 [5] 赵斌，何绍江，《微生物学实验》，科学出版社 ,2002 年。

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