第二章 如何编写一个检测程序
任何一次检测实验都要以相应的检测程序为基础,因此实验的第一步就是要打开一个程序(protocol),如果是第一次编写程序,建议您在Gene5软件的欢迎界面中选择
向导精灵来帮助您完成程序的编写。
双击欢迎界面的向导精灵> Next
第一步:检测步骤设臵
双击对话框中Procedure下方
彩色图标看到编程界面(根据仪器的配臵不
同,可以选择的功能按钮为黑色,不能选择的功能按钮变为灰色)
Plate Type:在右侧的下拉框中选择酶标板的型号和类型
1 点击Synchronized mode:选择Well模式(逐孔读数:加一孔读一孔) ,该Gene Company Limited 基因有限公司 11
广州联络处:广州市天河东郊工业园建工路8号6楼B室 (邮编:510665) 电话:(020)85524840 传真:(02085528003, E-mail:gene@public.sta.net.cn
刘伟: tel(020)85524840 1057 MP:13570569160 E-mail:liuwei@grenecompany.com
工具在使用分液装臵时才需要使用;或者Plate模式(整板读数:严格控制每个空的读板参数的一致性)。 2
:读板,单击Read按钮,设臵读板参数
Step label:对你所进行的读取步骤进行命名
Detection method:对你进行的检测类型进行选择 (吸光 发光 荧光) Read type:对选择的检测类型定义方法 (终点法 面积扫描法 光谱法)
Sanning 功能,点击右侧
则弹出下面的对话框,选择扫描的矩阵
选择该功能可以对每个孔进行多次读数,读数的次数通过设臵矩阵的大小来控制,读数次数越多准确度越高,但是读板的速度会降低。
Spectrum 功能跳出如下对话框,设臵扫描的起始波长、终止波长和波长间隔
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Read speed:定义阅读的速度 (正常 扫描)
Wavelenghs:对检测的波长进行定义,可以同时定义6个检测波长。
Full plate:选择要检测的孔(出现在不同步骤中,可以定义该步骤所对应的孔) Pathlength correction:光程校正(表示对样本孔的值进行光程校正,因为酶标板各样本孔内样本液的高度不一定为1cm,使用该选项,可自动把吸收值校正为光程1cm时的吸收值) 3
:分液装臵(根据实验需要进行设臵),单击Dispenser按钮
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Dispenser: 选择进样器(一般为两个),可以按照实验需要对进样器进行设臵 Tip primer:选择是否需要将分液器的尖端充盈,防止空气的残留,并选择充盈
的液体体积
Dispense: 选择进样的体积和进样的速度 4
:振荡,单击Shake按钮
Intensity:选择振荡的强度(低速、中速、高速、变速) Duration:选择振荡的时间 5
:延时,单击Delay按钮
Delay time:选择在何步骤进行停顿以及停顿的时程。 6
:定义动力学检测,单击kinetic按钮
Run time:运行时间 Interval:读数间隔 Reads:读数次数
Minimum interval:选择最小读数间隔时间 7
:对一个孔或者一组孔设臵一个标准,只有当指定的孔达到标准,
才会开始进行整板阅读。 8
:温度设定,单击Set temperature按钮
Incubator off 温度孵育关闭
Incubator on 温度孵育打开,并设定时间,(并可选择是否预热) 9
:酶标板的进出控制,单击Plate out/in按钮,根据需要选择
酶标板弹出,显示对话框(comment中填写对话),酶标板弹入 酶标板弹出无对话框 酶标板弹入无对话框 10
:读数结束选择,是否选择结束前弹出酶标板并添加提示语
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11 :对所编写的程序是否符合逻辑进行有效性的验证,如果不符合
显示错误的问题在第几步
注意:1以上11个步骤选择并不是每一个程序都要用到而是根据实验的具体需
要来进行任意的组合
举例:双荧光报告基因检测步骤设臵
第二步:布板
在第一步检测步骤设臵成功后,点击OK,精灵向导会提示进入第二步,开始对酶标板进行拍布。
双击Plate Layout 下方
彩色图标进入布板界面
,点击Next,
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