中国药科大学药物代谢动力学实验考查知识点整理(2)

放入冰冷的蔗糖溶液中清洗, 用剪刀剪成碎块, 反复清洗至无血色。加 4 倍肝质量的蔗糖溶液, 在冰浴中用组织匀浆机制成匀浆,再超声分散 30 s, 4 C下 10 000 r/min -离心20 min。 上清液用四层纱布过滤除漂浮脂物,滤液在 4 C 下 50 000 r/min 离心 60 min, 弃上清液, 沉淀用焦磷酸钾缓冲液悬浮均匀, 在 4 C 下50 000 r/min 离心 60 min, 沉淀即为肝微粒体。用Tris HCl 缓冲液悬浮均匀, 体积为原上清液的1/ 4 即可, 分装于塑料管中, 于- 80 C保存, 采用Lowry 法测定肝微粒体蛋白浓度 版本三：

2、NADPH体系:

葡萄糖- 6- 磷酸(G- 6- P)<10mM>

葡萄糖 －6 － 磷酸脱氢酶(G- 6- P- OH) <1U/mL> β-NADP+ <0.5mM> 氯化镁 5Mm

3、温孵实验步骤：

肝微粒体（0.2mg/mL,80μL），非那西丁溶液,37℃水浴预温孵5min,

加入NADPH体系溶液（启动剂，40μL），37℃水浴温孵，30min, 加入冰甲醇（终止试剂，100μL），终止温孵,

涡旋1min，高速离心（12000r/min）10min，转移上清液200μl 4、数据处理

双倒数法1/V的截距为1/Vmax, 1/[S]的截距为-1/ Km

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