中国药科大学药物代谢动力学实验考查知识点整理

药物代谢动力学实验考查知识点整理

第一部分：HPLC使用注意事项

1、HPLC组成：泵、进样器、色谱柱、检测器、数据系统/积分仪

2、反相色谱：

分离机理：“反相色谱”固定相极性小于流动相极性 常用流动相：乙腈、甲醇，水 3、色谱柱的分类：

按填料：球形、无定形 按含碳量：C18、C8

按应用：分析柱、制备柱、预处理柱 按粒径：150mm*4.6mm,5μm等 按填料类型：正相柱、反相柱、手性柱 4、键合相色谱柱的优缺点：

优点：稳定不易流失；

应用广泛，可使用多种溶剂； 消除硅羟基的不良影响；

缺点：pH得在3~8范围内

5、C18柱的活化：90% 10% 90%的甲醇溶液1ml/min依次冲洗30min 6、流动相：

使用之前需超声脱气（PPT18） 目的：色谱泵输液准确 提高检测性能

保护色谱柱

流动相脱气的方法：加热，抽真空，超声，通惰性气体 流动相组成： 流动相配置：

缓冲溶液现用现配，不要储存时间过长，避免pH值发生变

化和成分分解，影响色谱分离的效果；

有机溶液和缓冲液使用前均需经0.45μm微孔滤膜过滤； 流动相使用前脱气。 7、常用定量方法： 外标法

内标法（准确麻烦） 内标物的要求：

化学结构与待测品相似； 样品中不存在；

不与样品组分发生化学反应； 保留值与待测值接近； 浓度相当； 与其他色谱峰分离好

8、样品的预处理：

目的：除杂质；浓缩微量成分；改善分离；保护色谱柱；提

高检测灵敏度

方法：高速离心，过滤，选择性沉淀，衍生反应；液固萃取、

液液萃取

沉淀蛋白的溶剂：

有机溶剂：乙腈、甲醇 强酸：三氯乙酸、过氯酸 盐：50%硫酸铵、10%TCA 分析测定用试剂为色谱纯及以上，水为超纯水 第二部分：实验设计

1、考虑问题：动物种属、给药剂量、取血时间、采样量、血药浓度

大概范围

2、分析方法建立：色谱柱、流动相组成、柱温箱温度、样品处理方

法、风量下限与标曲范围

第三部分：实验相关条件与数据处理 实验一：

1、采血点设计一般原则

为获得给药后的一个完整的血药浓度-时间曲线，采样时间点的

设计应兼顾药物的吸收相、平衡相（峰浓度附近）和消除相。一般在吸收相至少需要2~3个采样点，对于吸收快的血管外给药的药物，应尽量避免第一个点是峰浓度（Cmax）；在Cmax附近至少需要3个采样点；消除相需要4~6个采样点。整个采样时间至少应持续到3~5个半衰期，或持续到血药浓度为Cmax的1/10~1/20。为保证最佳采样点，建议在正式试验前，选择2~3只动物进行

预试验，然后根据预试验的结果，审核并修正原设计的采样点。

2、动物给药方式：股静脉注射 3、麻醉：腹腔注射20%乌拉坦

4、采血方式：眼眶静脉丛采血（0.3ml/次）

5、蛋白沉淀方式：10%高氯酸，涡旋，15000rpm 10min,取100ul上

清二次离心

6、非那西丁色谱条件

流动相：50mM磷酸盐缓冲液（6.8g磷酸二氢钾加入到152mL的氢

氧化钠溶液（0.1mol/L）中，并稀释到1L）：乙腈（60:40）

色谱柱：岛津 Shimadzu VP-ODS; 150×4.6; 5μm 检测波长：254nm 柱温：40℃ 进样体积：20μL

6、参数计算

由曲线线性判断为一房室模型，参数计算如下：

参数 C0 T1/2 k Vd CL MRT AUC 公式 由y = 9.511e-0.02 令x=0得 由y = 9.511e-0.02 令y=0.5C0得 由T1/2=0.693/k得 Vd=X(给药量)/C0 X=1.25ml*2mg/ml=2.5mg CL=k*Vd MRT=1/k AUC=X/CL 值 9.511μl/ml 34.66min 0.02min-1 262.8ml 5.25min-1ml-1 50.01min 480μg.min

参数 k AUC 非房室 值 0.025min-1 297.14μg.min 由-k/2.303=-0.011 AUC0~100min=278.56 AUC100~∞=C100min/k=18.7 AUC0~100min+ AUC100~∞=278.56+18.7 AUMC0~100min=9030 AUMC100~∞=t100minC100min/k+C100min/k2= 3141.1 AUMC=AUMC0~100min+ AUMC100~∞ MRT=AUMC/AUC MRT=1/k C0=Div/VSS=2.5mg/344.65ml Div/AUC=2.5mg/297.14μg.min AUMC MRT C0 T1/2 CL Vss 12171μg*min2/ml 40.96min/40min 7.253μl/ml 无 8.41min-1ml-1 344.65ml VSS=Div.AUMC/AUC2=2.5mg*12171.1/297.142

实验二：

1、肝微粒体的制备方法 版本一：

获取肝脏：大鼠禁食不禁水24小时后取肝脏， 组织匀浆：称重剪成碎块后加入匀浆液制成匀浆，

差速离心：匀浆液4℃9000g离心15min，弃去沉淀和脂肪层取上清

液于100000g离心管中离心20min,弃上清，沉淀用pbs轻轻冲洗。

重悬沉淀：用10ml匀浆液重悬，冻存管分装后置-80℃冰箱内保存 蛋白定量：BCA法 版本二：

大鼠拉颈椎处死, 开腹取肝脏, 用滤纸吸干水分, 称质量。立即

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