中国药典三部标准(2005)

中国药典三部标准(2005年版)正文

101种

A群脑膜炎球菌多糖疫苗 拼音名： A Qun Naomoyanqiujun Duotang Yimiao

英文名：Group A MeningococcaI Polysaccharide Vaccine 书页号：2005年版三部-34

本品系用A群脑膜炎奈瑟菌培养液，经提取获得的荚膜多糖抗原，纯化后加 入适宜稳定剂后冻干制成。用于预防A群脑膜炎球菌引起的流行性脑脊髓膜炎。 1 基本要求

生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要 求。

2 制造 2.1 菌种

生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。 2.1.1 菌种名称及来源

生产用菌种为A群脑膜炎奈瑟菌CMCC 29201(A4)菌株。 2.1.2 种子批的建立

应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。 2.1.3 种子批的传代

主种子批启开后传代次数不得超过5代，工作种子批启开后至接种发酵罐培 养传代次数不得超过5代。

2.1.4 种子批菌种的检定 2.1.4.1 培养特性及染色镜检

菌种接种于含10%羊血普通琼脂培养基，脑膜炎球菌在25%不生长。于35～37% 二氧化碳的环境中培养16～20小时，长出光滑、湿润、灰白色的菌落，菌苔易取 下，在生理氯化钠溶液中呈现均匀混悬液。染色镜检应为革兰阴性双球菌、单 球菌。

2.1.4.2 生化反应

发酵葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气；不发酵乳糖、甘露醇、果糖及蔗糖(附 录ⅥV)。

2.1.4.3 血清凝集试验

取经35～37℃培养1 6～20小时的菌苔，混悬于含0.5%甲醛的生理氯化钠溶液 中，或56℃加热30分钟杀菌以后，使每1ml含菌1.o×10〈9〉～2.o×10〈9〉，与同群 参考血清做定量凝集反应，置35～3℃过夜，次日再置室温2小时观察结果，以肉 眼可见清晰凝集现象(+)之血清最高稀释度为凝集反应效价，必须达到血清原效 价之半。

2.1.5 种子批的保存

原始种子批和主种子批应冻干保存于2～8℃。 2.2原液

2.2.1 生产用种子

启开工作种子批菌种，经适当传代，经检定合格后， 接种于改良半综合培 养基或其他适宜培养基，制备数量适宜的生产用种子。 2.2.2 生产用培养基

采用改良半综合培养基或经批准的其他适宜培养基。培养基不应含有与十 六烷基三甲基溴化铵能形成沉淀的成分。 2.2.3 培养

采用培养罐液体培养。在培养过程中取样进行纯菌检查，涂片做革兰染色镜 检，如发现污染杂菌，应废弃。 2.2.4 收获及杀菌

于对数生长期的后期或静止期的前期中止培养，取样进行菌液浓度测定及 纯菌检查，合格后在收获的培养液中加入甲醛溶液杀菌，或采用加热方法杀菌。 以确保杀菌完全又不损伤其多糖抗原为宜。 2.2.5 纯化 2.2.5.1 去核酸

将已杀菌的培养液(单批或多批混合)离心后收集上清液，加入十六烷基三甲 基溴化铵，充分混匀，形成沉淀；离心后的沉淀物加入适量氯化钙溶液，其最 终浓度为1mol/L，使多糖与十六烷基三甲基溴化铵解离；加入乙醇至最终浓度为 25%，2～8℃静置1～3小时或过夜，离心收集澄清的上清液。 2.2.5.2 沉淀多糖

于上述上清液中加入冷乙醇至最终浓度为80%，充分振摇。离心收集沉淀， 用无水乙醇及丙酮各洗2次以上，沉淀物即为多糖粗制品。应保存在－20℃以下， 待纯化。

2.2.5.3 多糖纯化

将多糖粗制品溶解于1/10饱和中性醋酸钠溶液中，使其浓度达10～20mg/ml； 按1：2容量用冷酚(100g结晶酚溶于40ml的1/10饱和醋酸钠溶液)提取数次，离心收 集上清液，并用0.1mol/L氯化钙溶液或其他适宜溶液透析，加入乙醇至终浓度为 75%～80%；离心收集的沉淀物用无水乙醇及丙酮各洗2次以上，干燥后用灭菌注 射用水溶解沉淀物，即为纯化多糖原液。提取过程应尽量在15℃以下进行。 2.2.6 原液检定

纯化多糖原液除菌过滤后，取样按3.1项进行。 2.2.7 保存及有效期

于-20℃以下保存，自多糖粗制品制造之日起有效期为5年。 2.3 半成品 2.3.1 配制

半成品可由单批或多批多糖原液合并后，用无菌无热原乳糖和灭菌注射用 水稀释制成。每1次人用剂量含多糖应不低于30μg，乳糖2.5～3.0mg。 2.3.2 半成品检定 按3.2项进行。 2.4 成品 2.4.1 分批

应符合“生物制品分批规程”规定。 2.4.2 分装及冻干

应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。冻干过程中制品温度应不高于30℃， 真空或充氮封口。 2.4.3 规格

每瓶含多糖150μg、300μg。每1次人用剂量含多糖应不低于30μg。 2.4.4 包装

应符合“生物制品包装规程”规定。 3 检定

3.1 原液检定 3.1.1 鉴别试验

采用免疫双扩散法(附录ⅧC)，本品与A群脑膜炎球菌抗体应形成明显沉淀线。 3.1.2 化学检定 3.1.2.1 固体总量

依法测定(附录ⅦM)。 3.1.2.2 蛋白质含量

应小于10mg/g(附录ⅥB第二法)。 3.1.2.3 核酸含量

应小于10mg/g，核酸在波长260nm处的吸收系数(E1% 1cm)为200(附录ⅡA)。 3.1.2.4 O-乙酰基含量

应不低于2mmol/g(附录ⅥF)。 3.1.2.5 磷含量

应不低于80mg/g(附录ⅦA)。 3.1.2.6 多糖分子大小测定

多糖分子的KD值应不高于O.40，KD值小于O.5的洗脱液多糖回收率应大于65% (附录ⅧG)。

3.1.3 无菌检查

依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。 3.1.4 细菌内毒素检查

应不高于100EU/μg(附录ⅫE凝胶限量试验)；也可采用热原检查法(附录ⅫD)检 查，应符合规定，注射剂量按家兔体重每lkg注射O.025μg多糖。 3.2 半成品检定 无菌检查

依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。 3.3 成品检定

除水分测定外，按制品标示量加入灭菌PBS复溶后进行其余各项检定。 3.3.1 鉴别试验

采用免疫双扩散法(附录ⅧC)，本品应与A群脑膜炎球菌抗体形成明显沉淀线。 3.3.2 外观

应为白色疏松体，按标示量加入PBS应迅速复溶为澄明液体，无异物。 3.3.3 化学检定 3.3.3.1 水分

应不高于3.O%(附录ⅦD)。 3.3.3.2 多糖含量

每1次人用剂量多糖含量应不低于 30μg。根据WHO规程规定的计算公式(多糖 含量：磷含量为1000：75)，先测定磷含量应不低于2.25μg(附录ⅦA)，再计算出多 糖含量。

3.3.3.3 多糖分子大小测定

每5批疫苗至少抽1批检查多糖分子大小。KD值应不高于0.40，KD值小于0.5的 洗脱液多糖回收率应大于65%(附录ⅧG)。 3.3.4 无菌检查

依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。 3.3.5 异常毒性检查

依法检查(附录ⅫF)，应符合规定。每只豚鼠注射剂量为500μg/m1，每只小鼠 注射剂量为100μg/0.5ml。

3.3.6 热原检查

依法检查(附录ⅫD)，应符合规定。注射剂量按家兔体重每lkg注射O.025μg多 糖。

3.4 稀释剂检定

稀释剂为无菌无热原PBS。 3.4.1 pH值

应为6.8～7.2(附录V A)。 3.4.2 无菌检查

依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。 3.4.3 异常毒性检查

依法检查(附录ⅫF)，应符合规定。 3.4.4 热原检查

依法检查(附录ⅫD)，应符合规定。注射剂量按家兔体重每lkg注射lml。 4 保存、运输及有效期

于2～8℃避光保存和运输，自分装之日起有效期为2年。 5使用说明

A群脑膜炎球菌多糖疫苗使用说明 【药品名称】

通用名称：A群脑膜炎球菌多糖疫苗

英文名称：Group A Meningococcal Polysaccharide Vaccine 汉语拼音：A Qun Naomoyanqiujun Duotong Yimiao

【成分和性状】本品系用A群脑膜炎奈瑟菌培养液，经提取获得的荚膜多糖 抗原．纯化后加入适宜稳定剂冻干制成。为白色疏松体，复溶后为澄明液体。 【接种对象】6个月～1 5周岁少年儿童。

【作用与用途】接种本疫苗后，可使机体产生体液免疫应答。用于预防A群 脑膜炎球菌引起的流行性脑脊髓膜炎。

【规格】每瓶为150μg、300μg多糖。每1次人用剂量含多糖应不低于30μg。 【用法用量】(1)按标示量加入所附稀释剂复溶，摇匀立即使用。

(2)于上臂外侧三角肌附着处皮下注射0.2ml或0.5ml(含多糖不低于30μg)。 (3)基础免疫注射2针，从6月龄开始，每针间隔3个月；3岁以上儿童只需注射 1次。接种应于流行性脑脊髓膜炎流行季节前完成。

根据需要每3年复种1次。在遇有流行情况下，可扩大年龄组做应急接种。 【不良反应】本疫苗反应轻微，偶有短暂低热，局部稍有压痛感，可自行 缓解。

【禁忌】(1)有癫痢、惊厥及过敏史者。

(2)患脑部疾患、肾脏病、心脏病及活动性结核者。 (3)患急性传染病及发热者。

【注意事项】 (1)疫苗瓶塞松动者．复溶后有异物或疫苗瓶有裂纹，均不得 使用。

(2)疫苗复溶后，应按规定人份(剂量)一次用完，不得分多次使用，剩余的疫 苗应废弃。

【 贮藏】于2～8℃避光保存和运输。 【包装】

【有效期】2年。 【执行标准】

【批准文号】 【生产企业】 企业名称： 生产地址： 邮政编码： 电话号码： 传真号码： 网址：

I型肾综合征出血热灭活疫苗

拼音名： Ⅰ Xing Shenzonghezheng Chuxuere Miehuoyimiao

英文名：Haemorrhagic Fever With Renal Syndrome (Type I)Vaccine，Inactivated 书页号：2005年版三部- 80

本品系用I型肾综合征出血热(简称I型出血热)病毒接种原代沙鼠肾细胞，经 培养、收获病毒液、灭活病毒，加入氢氧化铝佐剂后制成。用于预防I型肾综合 征出血热。

l 基本要求

生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关 要求。

2 制造

2．1 生产用细胞

生产用细胞为原代沙鼠肾细胞。 2．1．1 细胞管理及检定

应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。 2．1．2 细胞制备

选用2周龄左右沙鼠，无菌取肾，剪碎，经胰蛋白酶消化，分散细胞，接种 培养瓶，用MEM等适宜的培养液培养。 2．2 毒种

2．2．1 名称及来源

生产用毒株为I型出血热病毒Z〈［10］〉株。 2．2．2 种子批的建立

应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。

病毒接种鼠脑制备原始及主种子批。原始种子批传代应不超过第12代，主 种子批应不超过第13代，主种子批毒种接种原代沙鼠肾细胞制备工作种子批， 工作种子批应不超过第18代。

2．2．3 种子批毒种的检定

主种子批应进行以下全面检定，工作种子批应至少进行2．2．3．1～ 2．2．3．4项检定。

2．2．3．1 鉴别试验

毒种与已知I型出血热病毒免疫血清等量混合，置37℃水浴90分钟，接种 Vero-E〈［6］〉单层细胞，观察10～14天，以免疫荧光法测定，中和指数应大于 1000。

2．2．3．2 病毒滴定

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