邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验报告

实验一 邻二氮菲分光光度法测定微量铁

一．实验目的和要求

1、 掌握紫外可见分光光度计的基本操作；

2、 掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理和方法； 3、 掌握吸收曲线绘制及最大吸收波长选择； 4、 掌握标准曲线绘制及应用。

二．实验原理

邻二氮菲（1,10—邻二氮杂菲）是一种有机配位剂，可与Fe2+形成红色配位离子

2+Fe2++3 NNNFeN3

在pH=3~9范围内，该反应能够迅速完成，生成的红色配位离子在510nm波长附近有一吸收峰，摩尔吸收系数为1.1×104，反应十分灵敏，Fe2+ 浓度与吸光度符合光吸收定律，适合于微量铁的测定。

实验中，采用pH=4.5-5的缓冲溶液保持标准系列溶液及样品溶液的酸度；采用盐酸羟胺还原标准储备液及样品溶液中的Fe3+并防止测定过程中Fe2+被空气氧化。

三．实验仪器与试剂

1. 752型分光光度计

2. 标准铁储备溶液（1.00×10-3mol/L） 3. 邻二氮菲溶液（0.15%，新鲜配制） 4. 盐酸羟胺溶液（10%，新鲜配制） 5. 醋酸盐缓冲溶液 6. 50ml容量瓶7个 7. 5ml移液管4只 8．1cm玻璃比色皿2个 9. 铁样品溶液

四．实验步骤：

1、 标准系列溶液及样品溶液配制

按照下表配制铁标准系列溶液及样品溶液 编号 1 2 3 4 5 6 7（标准铁1x10-3M标准铁溶液 10％盐酸羟胺溶液 0.15％邻二氮菲溶液 醋酸盐缓冲溶液 说明 0.00ml 1.01.00ml 1.00ml 1.00ml 0ml 5.05.00ml 5.00ml 5.00ml 0ml 5.05.ooml 5.00ml 5.00ml 0ml 以上溶液均用移液管移取至50ml度并摇匀。 系列标准铁0 0.02mo0.04mo0.06mo溶液浓度 l/ml l/ml l/ml 溶液） 1.00ml 2.00ml 3.00ml 4.00ml 5.00ml 2.50ml 1.00ml 1.00ml 1.00ml 5.00ml 5.00ml 5.00ml 5.00ml 5.00ml 5.00ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻0.08mol/ml 0.10mol/ml ------- 2、 吸收曲线绘制

用1cm比色皿，以1号溶液作为参比溶液，测定4号溶液在各个波长处的吸光度，在坐标纸上以测定的吸光度为纵坐标，波长为横坐标，绘制吸收曲线，并从吸光曲线上找出最大吸收波长。 测定波480n482n484n486n488n490n492n494n496n498n长 m m m m m m m m m m 0.630.630.630.640.640.650.650.650.650.67吸光度 6 7 9 1 4 2 6 6 8 3 测定波500n502n504n506n508n510n512n514n516n518n长 m m m m m m m m m m 0.670.690.690.680.670.670.660.63吸光度 8 0.69 2 9 0.7 2 9 1 1 7 测定波520n522n524n526n528n530n532n534n536n538n长 m m m m m m m m m m 0.610.600.560.530.500.460.440.390.36吸光度 3 1 6 4 3 8 5 6 2 0.33 选择的最大吸收波长为:508(nm) 绘图如下：

吸收曲线0.80.70.60.5吸光度0.40.30.20.10470480490500510波长520530540吸收曲线5503、 标准曲线制作

在选定最大吸收波长处，用1cm比色皿，以1号溶液作为参比溶液，分别测定2至7号溶液的吸光度，在坐标纸上以吸光度平均值为纵坐标，系列标准溶液的浓度为横坐标制图，绘制标准曲线。 编号 吸光度A1 吸光度A2 吸光度A3 A平均值 2 0.236 0.236 0.236 0.236 3 0.463 0.463 0.463 0.463 4 0.7 0.7 0.7 0.7 5 0.936 0.936 0.936 0.936 6 1.127 1.127 1.127 1.127 7（样品溶液） 0.573 0.573 0.573 0.573 绘图如下：

1.41.21标准曲线y = 11.275x + 0.01592R = 0.99860.60.40.2000.020.040.06浓度（mol/ml)0.080.1吸光度0.8系列1线性 (系列1)0.12实验数据处理：

1. 样品溶液中铁含量计算

C读取值=（0.573-0.0159）/11.257=0.04952

Cx=C读取值×50.00/2.50=0.49×20=0.99(mol/ml)=0.99x10-3(mol/L) 2.摩尔吸光系数计算

ε=(A2－A1)/(c2－c1)=(0.466—0.242)/(0.04×10-3—0.02×10-3)=11.275mL/(mol·cm) =1.1275x104 L/(mol.cm)

实验讨论：

在本次实验中，比色皿在换装不同浓度的溶液时，必须用待测的溶液润洗至少三次，装入四分之三或五分之四左右，放入分光光度计样品室前，必须用吸收纸将表面擦拭干净，每更换一次比色皿要及时调零，等示数稳定后，再读取数据。我们组绘制吸收曲线时，最开始选择的吸收波长是502nm，但是经过我们重新实验，发现第二次数据和第一次数据完全不同，吸收波长也由502nm变为了508nm,可能是由于第一次实验操作不规范，再加上仪器的不稳定造成的。

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