实验三 紫外分光光度法测定维生素C含量

实验三 紫外分光光度法测定维生素C含量

一、实验目的

掌握UVmini-1240型紫外分光光度计的使用方法,，掌握紫外分光光度法定 量的原理，紫外吸收光谱曲线的绘制和测量波长的选择以及标准曲线的绘制。 二、实验原理

紫外分光光度法进行定量分析是有快速，灵敏度高及分析混合物中各组份有时不需要事前分离，不需要显色剂，因而不受显色剂温度及显色时间等因素的影响，操作简便等优点。目前广泛用于微量或痕量分析中。但有一个局限性，就是待测试样必须在紫外区有吸收并且在测试浓度范围服从比耳定律才行。 利用紫外光度法测定试样中单组份含量时，通常先测定物质的吸收光谱，然后选择最大吸收峰的波长进行测定。其原理与一般比色分析相同。

维生素C对于人体骨骼及牙齿的构成极为重要,能阻止及治疗怀血症，又能刺激食欲，促进生长，增强对传染病的抵抗能力，是人体必需的营养之一。维生素C又名丙种维生素及抗坏血酸，其结构式为：

CH2OHHOCHOOHOOH

易溶于水，不溶于有机溶剂。桔类、番茄、马铃薯、绿叶蔬菜等含有丰富的维生素C。 三、仪器与试剂

1． 维生素C贮备液100mg/L（临用前进行配制）

准确称取一定量的抗坏血酸，溶于无水乙醇中，并用无水乙醇定容于1000mL。 2． 25 ml容量瓶8只，100ml刻度移液管2支 3． 5 ml刻度移液管2支，1ml刻度移液管2支 4． 50ml烧杯1只，玻棒、洗球、吸球

5． UVmini-1240型分光光度计、石英比色皿2只

四、配制标准溶液

配制5mg/L、10mg/L、15mg/L、20mg/L和25mg/L维生素C标准溶液。 取25ml容量瓶5只，分别吸取一定量的100mg/L维生素C标准溶液贮备液，用蒸馏水稀释至刻度(计算出各溶液的浓度)。 五、数据记录及处理 1) 绘制维生素C吸收曲线

取标准系列溶液浓度为15mg/L的样品，以无水乙醇为参比，在320～220nm波长范围扫描，得维生素C吸收曲线，并确定λ2) 绘制标准曲线

将2号至6号溶液按浓度从小至大排列，分别在上述吸收曲线的最适波长λ

max

max。

下分析（以试样的溶剂为参比），得到浓度与吸光度的对应值，作浓度与吸光

度对应的标准曲线图。

表 维生素C浓度与吸光度关系

浓度mg/L 吸光度 5mg/L 10mg/L 15mg/L 20mg/L 25mg/L

3) 未知液的测定

将维生素C待测液在同样条件下检测，根据测得的吸光度在标准曲线图上查出其浓度，求出维生素C的含量。 【思考题】

1. 紫外分光光度法进行定量分析与可见光分光光度法进行定量分析比较有何优

点？

2. 分光光度计的组成由哪几部分组成？

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