植物体细胞繁殖及动物细胞增殖及其应用(3)

植物体细胞繁殖及动物细胞增殖及其应用

（１）细胞准备。分贴壁和悬浮细胞两种。前者可直接将两亲本细胞混合培养，后者需制成一定浓度的细胞悬浮液。 （２）细胞融合，加促融因子于将行融合的细胞之中，诱导融合。

（３）杂种细胞选择。利用选择性培养基等，使亲本细胞死亡，而让杂种细胞存活。

（４）杂种细胞克隆。对选出的杂种细胞进行克隆（选择与纯化），经过培养，就能获得所需要的无性繁殖系。 诱导细胞融合的方法：

生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（离心，震动，电刺激）。某些病毒如：仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白（fusion protein），可介导病毒同宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融合，因此可以用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。化学和物理方法可造成膜脂分子排列的改变，去掉作用因素之后，质膜恢复原有的有序结构，在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。

注：植物细胞融合较动物细胞难些。首先，植物细胞外面有细胞壁，因此需要先用纤维素酶去壁，形成原生质体后，才能进行细胞融合。其次，植物细胞融合后形成的杂种细胞，经过培养有可能分化发育成植株，而动物细胞的杂种细胞则缺乏此种能力。植物体细胞融合的过程大致包括：细胞分离，原生

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