裂解液配制方法

1、红细胞裂解液（去除红细胞） 配制试剂所需材料：

1. Ammonium Chloride x10 Lysing Concentrate Solution a) NH4Cl (1.5 M) 80 g b) KHCO3 (100 nM) 10 g c) Na4EDTA (10 nM) 3.7 g d) Distilled H2O 1000 mL 2. 1N HCl or 1N NaOH（调节pH值用） 配制步骤：

1. 将以上a、b、c试剂溶于900ml 去离子水中；

2.调节溶液pH值到7.2-7.4，加去离子水定容到1000ml； 3.在制备工作液时，将此储存液稀释10倍后使用。 保存：

1.10x 储存液储存于2-8°C不能超过半年（六个月）；

2.在使用前，工作液每天都应该新鲜配制放置于室温，当日用不完的弃掉。

2、 ripa裂解液

NP-40 or Triton-100 1% TrisHCl (pH 8.0) 50mmol/L NaCl 150mmol/L

PMSF（苯甲基磺酰氟） 0.1mmol/L(100μg/ml) Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 μmol/L(0.7μg/ml) Leupeptin（亮抑制肽） 0.5mg/ml

Aprotinin（抑蛋白酶肽） 0.3μmol/L(1μg/ml)

（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；

Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0)； Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；

Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）

3、细胞裂解液 （Tris－HCL） 1．1M Tris 溶液的配置

取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。 2．1M Tris－HCL Ph=8.0溶液的配置

取 1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=8.0（需浓盐酸约8.5ml），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。 3. 0.5M EDTA溶液的配置

称EDTA－Na2 37.2g 先用140ml ddH2O溶解，加入14ml NaOH（10M）使EDTA－Na2溶解，再用NaOH（10M）溶液调至Ph=8.0，加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。

4. 细胞裂解液的配制

称15gCTAB（Hexadecyltrimethylammonium bromide）（先用约600ml ddH2O加热溶解）放入烧杯中，加入75ml 1M Tris－HCL（Ph=8.0），58.5g NaCL（先用少量ddH2O溶解），30ml 0.5M EDTA，定容至1000ml，混合均匀备用。

4、组织裂解液配方：`

7M Urea(60. 06) 4.2042 g 2M thiourea(76.12) 1.5224 g 100mM DTT 0.1543 g 4% CHAPS 0.4 g 0.5mM EDTA 0.00146 g 40Mm Tris 0.0485 g 2%(v/v) NP-40 0.2 ml 1%(v/v) Triton X-100 0.1 ml 5mM PMSF用前加 0.00871 g 2% pharmalyte 0.2ml

共10ml分装成400μl/每管（可应用于30-80毫克组织裂解）

蛋白质的定位与蛋白质裂解液的选择： 全细胞：NP-40或RIPA 细胞质（可溶）：Tris-HCl 细胞质（细胞骨架）：Tris-Triton 细胞膜：NP-40或RIPA 细胞核：RIPA 线粒体：RIPA

百度搜索“77cn”或“免费范文网”即可找到本站免费阅读全部范文。收藏本站方便下次阅读，免费范文网，提供经典小说综合文库裂解液配制方法在线全文阅读。