养细胞步骤

一、细胞换液

1、 实验室和超净台紫外线消毒30min

2、 开始实验，关闭紫外线，玻璃板不能超过标记的黄线，打开通风设备

3、 用酒精棉由里向外消毒实验台，再用酒精棉消毒双手，放入超净台的试剂瓶应先用

酒精棉擦拭在放入超净台中

4、 将细胞培养瓶瓶口过火，然后打开再将瓶口和瓶盖过火，如果培养瓶数量过多应将

瓶盖与培养瓶对应以免盖错造成互相感染

5、 倒掉培养瓶中的培养液，瓶口应尽量远离废液缸，以免造成污染

6、 用移液枪吸取5mlPBS,取枪头需用镊子夹取，镊子用之前过火，只夹取枪头尾部，

然后用手拿出，注意手只能碰枪头尾部的头部，枪头不能接触超净台，用移液枪吸取PBS时应该将枪头的头部过火，移液枪的枪头不能碰到试剂瓶，进行操作时注意胳膊不应放到培养瓶上方

7、 将PBS注入到培养瓶中，应将移液枪中的液体打到没有细胞的那一面 8、 将培养瓶放倒轻轻晃动，洗去培养瓶细胞面的死细胞以及细胞的代谢产物，倒掉PBS 9、 换取另一个新的枪头，吸取培养液打入到培养瓶中，将培养瓶与瓶盖过火，盖好，

如果多个培养瓶枪头不碰到瓶壁，则不用更换枪头，否则需要更换枪头 10、 放入培养箱中，瓶盖应该拧松，与外界空气想通

注意事项：1、进入超净台的试剂瓶应消毒 2、使用的器械应该进行过火

3、试剂瓶应该过火之后打开，盖上之前也应该过火 4、注意胳膊不能放到培养瓶口的上方 5、倒废液时瓶口远离废液缸

6、拿出的培养瓶应该拧紧，放入培养箱的培养瓶应将瓶盖拧松使之与外界

空气想通

7、所用试剂在使用前应该预热

二、细胞传代

1、 将培养瓶拿到超净台中，倒掉培养液

2、 加入PBS冲洗坏死的细胞以及细胞代谢产物

3、 加入胰酶溶解细胞，加入胰酶后放入培养箱中，一段时间后可用显微镜看到细胞变

圆，从培养瓶上脱落下来，形成一层白膜

4、 加入培养液反复吹打，使细胞从培养瓶上脱落，吹打应该尽量减少泡沫的产生，以

免导致细胞的机械性损伤

5、 将培养瓶中的液体移到试管中，进行离心

6、 离心后出现细胞沉淀，弃掉上层液体，重新加入培养液，然后反复吹打使细胞混匀 7、 将混匀的细胞加到培养瓶中，在将细胞以及培养液导入的培养瓶时，移液枪应朝向

细胞不生长的那一面将细胞与培养液导入到培养瓶中

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