佛山市华普生药业有限公司 R-TS-VP-4001-00 （3）人工牛黄阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除人工牛黄不称取外，称取甲硝唑原料0.80g，淀粉0.08g，二氧化硅0.04g共置量瓶中，加氯仿15ml，超声处理20分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为人工牛黄阴性样品溶液。
试验方法：
照薄层色谱法（中国药典2015年版四部0502）试验，吸取上述溶液各4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇（20：25：2：3）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟至斑点显色清晰，日光下或置紫外光灯（365nm）下检视。
7.1.2方法确认接受标准：
（1）胆酸、猪去氧胆酸对照品溶液：显2个主斑点；
（2）3批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：在与对照品色谱相应位置上，显同颜色斑点； （3）人工牛黄阴性样品溶液：在与对照品色谱相应位置上，不显斑点。 7.1.3方法确认记录与确认结果
（1）电子天平 型号 编号 ， 数显鼓风干燥箱型号 编号 硅胶G薄层板批号 ，来源 （2）胆酸对照品称样量 ，稀释倍数 猪去氧胆酸对照品称样量 ，稀释倍数 （3）人工牛黄甲硝唑胶囊内容物称样量：
批号 ，称样量 ；批号 ，称样量 ；批号 ，称样量 ； （4）项目确认结果
【鉴别（1）】人工牛黄薄层色谱鉴别---方法专属性确认结果
测试样品 胆酸、猪去氧胆酸对照品溶液 显2个主斑点 20151201批 与对照品色谱薄层色谱 相应位置显同颜色斑点 人工牛黄甲硝唑胶囊 20151202批 相应位置显同颜色斑点 20151203批 相应位置显同颜色斑点 与对照品色谱与对照品色谱人工牛黄阴性样品 与对照品色谱相应位置不显斑点 项目确认结果: □通过 □不通过 检查人/日期： 复核人/日期： 7.2【鉴别（2）】甲硝唑紫外光谱鉴别方法确认 7.2.1鉴别方法的专属性确认方法：
参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【鉴别（2）】项下规定，分别制备以下溶液，进行鉴别方法专属性的确认：
（1）甲硝唑对照品溶液：取甲硝唑对照品约20.0mg，精密称定，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解，稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀即得。
（2）3批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：分别精密取本品3批的内容物约59mg（约相当于甲硝唑50mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约80ml，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置200ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀即得。
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佛山市华普生药业有限公司 R-TS-VP-4001-00 （3）甲硝唑阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除甲硝唑不称取外，称取淀粉10mg，二氧化硅5mg、人工牛黄3mg置200ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）160ml微温，放冷后稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置200ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀即得。
试验方法：
照分光光度法，取上述各种溶液扫描紫外吸收光谱 7.2.2方法确认接受标准：（1）甲硝唑对照品溶液：在277±2nm的波长处有最大吸收；在241±2nm的波长处有最小吸收；
（2）3批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：在277±2nm的波长处有最大吸收；在241±2nm的波
长处有最小吸收；
（3）甲硝唑阴性样品溶液：在277±2nm的波长处无最大吸收；在241±2nm的波长处无最小
吸收。
7.2.3方法确认记录与确认结果
（1）电子天平 型号 编号 ，紫外分光光度计型号 编号 （2）甲硝唑对照品称样量20.1 mg （3）人工牛黄甲硝唑胶囊内容物称样量：
批号 ，称样量 ；批号 ，称样量 ；批号 ，称样量 ； （4）项目确认结果
【鉴别（2）】甲硝唑紫外光谱鉴别---方法专属性确认结果
测试样品 最大吸收 最小吸收 甲硝唑对照品 人工牛黄甲硝唑胶囊 20151201批 20151202批 20151203批 甲硝唑阴性样品 277±2nm无最大吸收 241±2nm无最小吸收 277±2nm 241±2nm 277±2nm 241±2nm 277±2nm 241±2nm 277±2nm 241±2nm 项目确认结果: □通过 □不通过 检查人/日期： 复核人/日期 7.3【鉴别（3）】人工牛黄胆红素液相色谱鉴别方法确认 7.3.1鉴别方法的专属性确认方法：
参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【鉴别（3）】项下规定，分别制备以下溶液，进行鉴别方法专属性的确认：
（1）胆红素对照品溶液：取胆红素对照品约10.0mg，精密称定，置100ml量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，摇匀，精密量取1.0ml置25ml棕色量瓶中, 加氯仿-甲醇-水-盐酸(90：10：0.3：0.03)混合液稀释至刻度，制成每1ml中含胆红素约4μg的溶液，即得。
（2）样品提取溶剂：氯仿-甲醇-水-盐酸（90：10:0.3:0.03）的混合液
（3）人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：取20151201批本品的内容物约1.7g（约相当于胆红素0.2mg），精密称定，置50ml棕色量瓶中，加氯仿-甲醇-水-盐酸（90：10:0.3:0.03）混合液约40ml，超声提取15分钟，取出，迅速冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。。
（4）人工牛黄阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除人工牛黄不称取外，称取甲硝唑1.45g，淀粉0.145g，二氧化硅0.072g共置50ml棕色量瓶中，加氯仿-甲醇-10%
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佛山市华普生药业有限公司 R-TS-VP-4001-00 盐酸（50：50:0.3）混合液约40ml，超声提取15分钟，取出，冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
试验方法：
精密吸取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
7.3.2方法确认接受标准：（1）人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液主峰保留时间与胆红素对照品溶液主峰保留时间一致（相对偏差不超过0.5%）；
（2）人工牛黄阴性样品溶液、样品提取溶剂在胆红素峰保留时间处均应为平直基线，无吸收峰。 7.3.3方法确认记录与确认结果
（1）电子天平 型号 编号 ，高效液相色谱仪型号 编号 （2）胆红素对照品称样量：9.90mg （3）人工牛黄甲硝唑胶囊内容物称样量： 批号 20151201 ，称样量 （4）项目确认结果
【鉴别（3）】人工牛黄胆红素液相色谱鉴别---方法专属性确认结果
测试样品 胆红素峰保留时间 胆红素对照品 7.183min 成品 7.170min 样品提取溶剂 在胆红素峰保留时间处为平直基线，无色谱峰。 人工牛黄阴性样品 在胆红素峰保留时间处为平直基线，无色谱峰。 项目确认结果: □通过 □不通过 检查人/日期： 复核人/日期 7.4甲硝唑含量测定方法专属性确认
7.4.1甲硝唑含量测定方法的专属性确认方法：
参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定 甲硝唑】项下规定，分别制备以下溶液，进行方法专属性的确认：
（1）甲硝唑对照品溶液：取甲硝唑对照品约20.0mg，精密称定，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解，稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀即得。
（2）3批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：分别精密取本品3批的内容物约59mg（约相当于甲硝唑50mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约80ml，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置200ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀即得。
（3）甲硝唑阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除甲硝唑不称取外，称取淀粉10mg，二氧化硅5mg、人工牛黄3mg置200ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）160ml微温，放冷后稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置200ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀即得。
试验方法：
照分光光度法，取上述各种溶液扫描紫外吸收光谱，并读取吸收峰处的吸收度。 7.4.2方法确认接受标准：（1）甲硝唑对照品溶液：在277±2nm的波长处有最大吸收； （2）3批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：在277±2nm的波长处有最大吸收；
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佛山市华普生药业有限公司 R-TS-VP-4001-00 （3）甲硝唑阴性样品溶液：在277±2nm的波长处基本无吸收，吸收度A值接近0。 7.4.3方法确认记录与确认结果
（1）电子天平 型号 编号 ，紫外分光光度计型号 编号 （2）甲硝唑对照品称样量20.1 mg （3）人工牛黄甲硝唑胶囊内容物称样量：
批号 ，称样量 ；批号 ，称样量 ；批号 ，称样量 ； （4）项目确认结果
甲硝唑含量测定---方法专属性确认结果
测试样品 甲硝唑对照品 人工牛黄甲硝唑胶囊 20151201批 20151202批 20151203批 甲硝唑阴性样品 最大吸收 在277±2nm在277±2nm在277±2nm在277±2nm在277±2nm基本无吸有最大吸收 有最大吸收 有最大吸收 有最大吸收 收，吸收度A=0 项目确认结果: □通过 □不通过 检查人/日期： 复核人/日期 7.5甲硝唑含量测定方法的线性关系与线性范围确认 7.5.1甲硝唑含量测定方法的线性关系与线性范围确认方法：
参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定 甲硝唑】项下规定，分别制备以下溶液，进行线性关系与线性范围的确认：
（1）甲硝唑对照品贮备液：取甲硝唑对照品约20.0mg，精密称定，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解，稀释至刻度，摇匀。精密量取6ml置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀即得。
（2）线性关系测试溶液：分别精密量取甲硝唑对照品贮备液4ml、5ml、6ml、7ml、10ml置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀得系列浓度的测试溶液。
试验方法：照紫外-可见分光光度法，在277nm的波长处测定上述系列溶液的吸收度。计算出各个测试溶液的甲硝唑浓度，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，计算线性回归方程、回归系数R、线性范围。
7.5.2方法确认接受标准：（1）测试溶液的甲硝唑浓度与吸收度之间呈良好线性关系，回归系数R：0.995≤R≤1；
（2）甲硝唑浓度线性范围：应涵盖人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定 甲硝唑】项下样品溶液中甲硝唑浓度12.5μg/ml的80%～120%，即结果的线性范围应涵盖10.0μg/ml～15.0μg/ml。 7.5.3方法确认记录与确认结果
（1）电子天平 型号 编号 ，紫外分光光度计型号 编号 （2）甲硝唑对照品称样量20.1 mg （3）项目确认结果
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佛山市华普生药业有限公司 R-TS-VP-4001-00 甲硝唑含量测定方法-----线性关系与线性范围确认
对照品浓度（ug/ml） 277nm的A值 线性回归方程 回归系数R 28.04 0.313 10.05 0.389 12.06 0.464 14.07 0.544 20.10 0.783 y=0.039x-0.0037 R=0.9998 2线性范围 甲硝唑浓度 8.04 ug/ml～20.10 ug/ml 项目确认结果: □通过 □不通过
检查人/日期： 复核人/日期 7.6甲硝唑含量测定方法准确度确认（回收率试验） 7.6.1甲硝唑含量测定方法的准确度确认方法：
参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定 甲硝唑】项下规定，分别制备以下溶液，进行方法准确度的确认：
（1）甲硝唑阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，精密称取人工牛黄25.0mg，淀粉100.0mg，二氧化硅50.0mg共置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀即得。
（2）回收率测试溶液：精密称取甲硝唑工作对照品约50mg，置100ml量瓶中，精密加入甲硝
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