第八讲 单链噬菌体载体及噬菌粒载体(5)

菌株

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c.选择：涂布在Xgal平板上，选择重组子

图5-39 通过加衔接物的方法在pUC119噬菌粒载体上克隆目的基因的基本程序

5．影响噬菌粒单链DNA产量下降的可能因素

许多噬菌粒在辅助噬菌体感染后，有时其单链DNA的产量较低，且重复性也差。只相当于带有同一外源DNA区段的丝状噬菌体载体的病毒颗粒产量的1/100-1/10，其影响因素可能是： A.噬菌粒携带的基因间隔区的确切序列

携带完整基因间隔区的质粒，由于干扰了辅助病毒DNA的复制，从而抑制了子代噬菌体颗粒的产生。 B.基因间隔区插入质粒的具体位置

基因间隔区插入pBR322HindⅢ位点所构成的噬菌粒，会严重干扰野生型噬菌体的生长，而将插入AhaⅢ位点的效果则不然。

C.辅助噬菌体的性质

野生型丝状噬菌体及其抗干扰突变株都被用作辅助噬菌体，一般说来是：

抗干扰的噬菌体突变株对小噬菌粒(插入外源DNA片段小于5kb)效果最好；

野生型噬菌体对大的噬菌粒(插入外源DNA片段大于10kb)效果最好。

D.克隆于噬菌粒的外源DNA的大小与性质

因外源DNA片段大小而异，单链DNA的产量可变动在5-10倍之间。一般说来，外源DNA片段越大，产量也就越低。 总之，噬菌粒作为双功能载体展示出巨大的潜力，然而可惜的是在某些系统中噬菌粒单链DNA产量变化莫测，而且往往产量太低，以致不敷使用，只能充当一两次双脱氧测序的模板。

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