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芦笋总皂苷含量测定的比色法研究

时间:2012-08-26 23:55 来源:未知 手机版
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                  作者:赵建华, 宋擎, 汪素芳, 苏强, 张立伟

【摘要】    目的考察糖类、氨基酸及黄酮类物质对茴香醛-硫酸法测定芦笋总皂苷含量时的影响,并确定该法的最佳比色条件。方法选用菝葜皂苷元为对照品,采用茴香醛-硫酸法,在429 nm处测定糖类、氨基酸及黄酮类物质的吸光度,并利用正交实验设计优化比色条件。结果在429 nm处3类物质除黄酮类有较小的末端吸收外均无明显吸收,干扰较小。最优比色条件为样品挥干,加入1%茴香醛无水乙醇溶液0.2 ml,100℃水浴30 min,冷却后测定。结论该法操作简便,干扰小,比色条件经济,可靠,便于实际应用。

【关键词】  芦笋边角料 总皂苷 茴香醛-硫酸法 干扰因素考察 比色条件优化

    芦笋Asparagus officinalis Linn.,学名石刁柏,为百合科天门冬属多年生草本植物,是一种药食两用的植物,其根茎入药,性苦,微辛,微温,功能温肺下气[1,2]。成分分析表明,芦笋中含有游离氨基酸、维生素、微量元素硒等多种营养成分,以及甾体皂苷、多糖、黄酮类等药用成分[3],具有极高的药用价值。现代药理学研究表明:芦笋提取物对多种癌细胞均有抑制作用,具有降血脂、提高人体免疫功能、抗衰老等功能,其中,甾体皂苷为重要的物质基础[4]。国内外文献报道,芦笋中含有多种甾体化合物,已分离得到19种甾体皂苷[5~7],结构分析表明,芦笋皂苷多为螺甾皂苷,其苷元多为菝葜皂苷元[4]。

    目前,植物总皂苷的含量测定主要为比色法,选用不同的显色体系,常见有乙酸酐-浓硫酸法、高氯酸法、浓硫酸法、香草醛-高氯酸法、香草醛-硫酸法、对二甲氨基苯甲醛法及茴香醛-硫酸法等7种。我们前期研究发现[8],针对芦笋总皂苷的测定,综合考虑各因素的影响,茴香醛-硫酸法优于其它6种方法。本文基于茴香醛-硫酸试剂与螺甾皂苷的专属性反应,以菝葜皂苷元为对照品,考察了芦笋中几种常见物质:糖类(葡萄糖、蔗醣、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、果糖),氨基酸(半胱氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸、赖氨酸、酪氨酸、亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、缬氨酸、异亮氨酸)及黄酮类(槲皮素、芦丁)对茴香醛-硫酸比色法[9]测定芦笋总皂苷含量的影响,并利用正交实验法优化了茴香醛-硫酸比色法的最佳比色条件,以期为进一步精确测定芦笋总皂苷含量奠定基础。

  1  仪器与材料

  1.1  仪器 HP 8453UV-Vis 吸收光谱仪(美国惠普公司);UNICO 7200型可见分光光度计[尤尼柯(上海)仪器有限公司];BS110s电子天平(北京塞多斯天平有限公司)。

  1.2  材料茴香醛(CP,天津市光复精细化工研究所);菝葜皂苷元(中国药品生物制品检定所,批号110744-200508);芦笋总皂苷(本室自制);槲皮素(中国药品生物制品检定所,批号 200406);芦丁(中国药品生物制品检定所,批号 020620);所用单糖、双糖、氨基酸及其余化学试剂均为国产分析纯试剂。

  2  方法与结果

  2.1  茴香醛-硫酸法的干扰因素考察

  2.1.1  对照品溶液的制备

  精密称取菝葜皂苷元5 mg,置于10 ml容量瓶中,用甲醇溶解,定容,吸取1 ml溶液稀释至10 ml,即得。

  2.1.2  样品溶液的制备依次精密称取芦笋总皂苷、各种糖类、氨基酸、黄酮各5 mg,分别置于10 ml容量瓶中,用甲醇溶解,定容,即得。

  2.1.3  显色溶液的制备吸取8 ml无水乙醇于10 ml容量瓶中,加入1 ml浓硫酸,摇匀,冷却至室温,加入50 μl茴香醛,无水乙醇定容,摇匀,即得。
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