药物分析实验2012(6)

不稳定的蓝色碳正离子，反应式如下：

CH3CH3CH3CH2CH3CH3CH3CH3CH3CH3OCH2OCRCH3CH3SbCl3CH3CH3CH2CH3CH3SbCl5RCOO.

实验方法：取本品，加三氯甲烷稀释成每1ml中含维生素A10~20U的溶液；取1ml，加25%三氯化锑的三氯甲烷溶液2ml，即显蓝色至蓝紫色，放置后，蓝色渐消褪。

（二） 含量测定——三点校正法

实验原理：用分光光度法测定维生素A在特定波长处的吸光度来计算其含量。由于维生素A制剂中含有稀释用油，且维生素A原料药中混有其他杂质，因此测定吸光度中含有无关吸收引入的误差，需用校正公式校正以得到正确结果。其详细内容参见附录Ⅱ-D。

实验方法：

取装量项下的内容物适量，精密称定，加环己烷溶解并定量稀释制成每1ml中含9~15U的溶液，照紫外-可见分光光度法，测定其吸收峰的波长，并在表9所列各波长处测定吸光度，计算各吸光度与波长328nm处吸光度的币值和波长328nm处的E1cm值。

表9 维生素A测定第一法的药典规定值

波长（nm）

测得吸光度

计算值

300 316 328 340 360

A1 A2 A3 A4 A5

A1/A3 A2/A3 A3/A3 A4/A3 A5/A3

吸光度比值

药典规定值 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299

1!

1如果吸收峰波长在326~329nm之间，○且所测得各波长吸光度比值不超过表中规定的±0.02,可用下式计算含量：

每1g供试品中含有的维生素A的单位=E1cm（328nm）31900

2如果吸收峰波长在326~329nm之间，○但所测得的各波长吸光度比值超过表中规定值的±0.02，应按下式求出校正后的吸光度，然后再计算含量：

A328（校正）=3.52(2A328-A316-A340)

3如果在328nm处的校正吸光度与未校正吸光度相差不超过±3.0%，则不用校○

正吸光度，仍以未经校正的吸光度计算含量。

4如果校正吸光度与未校正吸光度相差在-15%至-3%之间，则以校正吸光度计算○含量。

5如果校正吸光度超出未校正吸光度的-15%至-3%的范围，或者吸收峰波长不在○

326~329nm之间，则供试品须按下述第二法测定。第二法的详细描述参见附录Ⅱ-D。

中国药典（2005）规定，本品含维生素A应为标示量的90.0%~120.0%。 五、

注意事项

1%1． 鉴别反应必须在无水、无醇的条件下进行。因此，所用仪器必须干燥无水，所用试剂必须为无水试剂，所用三氯甲烷中必须不含醇。

2． 维生素A遇光易氧化变质，实验应尽量在暗处快速进行。 3． 维生素A测定注意事项的详细描述参见附录Ⅱ-D。 4． 紫外-可见分光光度法注意事项的详细描述参见附录Ⅵ-A。 5． 滴剂分析注意事项的详细描述参见附录Ⅲ-D。 六、

计算

维生素A的含量测定计算参见含量测定中的实验方法及附录Ⅱ-D相关内容。

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七、 思考题

1． 鉴别反应为何必须在无水、无醇的条件下进行？

2． 为何不直接以紫外-可见分光光度法测定维生素A的含量，而要采用较为繁琐的三

点校正法？用于测定的三点该如何选择？

3． 应用三点校正法测定维生素A的含量，何时采用第一法，何时采用第二法？第二

法如何操作？

4． 计算式中的参数1900是如何得来的？

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实验八 牛黄解毒片的鉴别

[目的要求]

1. 掌握中药制剂定性分析的一般原理和方法; 2. 掌握牛黄解毒片的原理及有关操作. [基本原理]

1. 处方

人工牛黄5g 雄黄50g 石膏200g 大黄200g 黄芩150g 桔梗100g 冰片25g 甘草50g

2. 原理

(1) 显微鉴别法利用显微镜来观察中药制剂中原药材的组织、细胞或内含物等特征，从而鉴别制剂的处方组成。凡以药材粉碎后直接制成制剂或添加有粉末药材的制剂，由于其在制作过程中原药材的显微特征仍保留在制剂中，因此均可用显微鉴别法进行鉴别。本实验用显微鉴别法鉴别大黄和雄黄。

(2) 微量升华法可用于鉴别中药制剂中具有升华性质的化学成分。本实验采用微量升华法鉴别冰片。冰片的升华物加一定试剂处理后显出不同颜色。

(3) 显色反应则利用颜色反应鉴别中药制剂的组成。本实验利用黄酮类成分和蒽醌类成分的显色反应鉴别黄芩和大黄。黄酮类成分在镁粉与盐酸作用下易被还原，迅速生成红色；蒽醌类成分遇碱液显红色，在酸性溶液中被还原则显黄色。

(4) 薄层色谱法将中药制剂样品和对照品在同一条件下进行分离分析，观察样品在对照品相同斑点位置处是否有同一颜色（或荧光）的斑点，来确定样品中有无要检出的成分。本实验用薄层色谱法鉴别牛黄中组分胆酸。采用10%硫酸乙醇溶液显色，加热显色后，在紫外灯（365nm）下检视，胆酸呈黄绿色荧光。

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[仪器与试剂] （一） 仪器 显微镜、365nm紫外灯 （二） 试剂 1. 水合氯醛试液

取水合氯醛50g，加水15ml与甘油10ml使溶解，即得。 2. 稀甘油

取甘油33ml，加水稀释使成100ml，再加樟脑一小块或液化苯酚一滴，即得。 3. 1%香草醛硫酸溶液

取香草醛0.1g，加硫酸10ml使溶解，即得。 4. 10%硫酸乙醇试液

取硫酸57ml，加乙醇稀释至1000ml，即得。 [实验操作]

（一） 大黄和雄黄的显微鉴别

取本品1片，研细，取少许置载玻片上，滴加适量水合氯醛试液，透化后加稀甘油1滴，盖上盖玻片，用吸水纸吸干周围透出液，置显微镜下观察：草酸钙簇晶大直径60~140μm(大黄）。不规则碎块金黄色或橙黄色，有光泽（雄黄）。 （二） 冰片的微量升华鉴别

取本品1片，研细，进行微量升华，得到的白色升华物，加新配制的1%香草醛硫酸溶液1~2滴，液滴边缘渐呈玫瑰红色。 （三） 牛黄解毒片中黄芩和大黄的显色反应鉴别

取本品6片，研细，加乙醇10ml,温热10min,滤过，取滤液5 ml，加少量镁粉与盐酸0.5 ml,加热，即显红色（黄芩）；另取滤液4 ml，加氢氧化钠溶液，即显红色，

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再加浓过氧化氢溶液（30%），加热，红色不消失，加酸成酸性后，则红色变为黄色（大黄）。

（四） 牛黄的薄层色谱鉴别

取本品2片，研细，加三氯甲烷10 ml研磨，滤过，滤液蒸干，加乙醇0.5 ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸对照品，加乙醇制成每1 ml含1㎎的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇（20:25:2:3）的上层溶液为展开剂，展开后，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃干燥10min，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 [注意事项]

1． 牛黄解毒片有素片和糖衣片两种，糖衣片应先除去糖衣，然后进行鉴别试验。 2． 薄层色谱鉴别采用10%硫酸乙醇溶液显色，由于硫酸吸水性强，阴雨天操作，斑

点易扩散，故加热显色后，应尽快在紫外灯下检视。 [思考题]

1． 中药制剂定性鉴别的方法有哪些？各有何特点？

2． 中药制剂药味较多，逐一鉴别有困难，你认为应如何选择鉴别对象？

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