病理生理学实习指导(2)

四、失血性休克

㈠实验目的

1.复制兔失血性休克模型。

2.观察兔在失血性休克时的表现及微循环变化。 3.抢救失血性休克。

4.探讨失血性休克的发生机制。 ㈡实验对象

健康成年兔，体重2.5～3.0kg。 ㈢器材与药品

手术器械（手术刀，止血钳，眼科剪，眼科镊，手术镊等），输血输液装置，中心静脉压测试装置，微循环观察装置，气管插管，动脉套管，静脉导管，输尿管导管，记滴器，温度计，注射器（1ml，10ml，50ml）。

20％氨基甲酸乙酯溶液，生理盐水，微循环灌流液，0.3%肝素溶液。 ㈣步骤与观察 ⒈取兔一只，称重后耳缘静脉麻醉。 ⒉将麻醉的兔仰卧位固定在兔台上，行气管插管术、左侧颈总动脉和右侧颈外静脉插管术。 ⒊经耳缘静脉注入0.3%肝素溶液（2 ml·kg -1） ⒋将气管插管与呼吸描记装置连接。 ⒌将动脉插管接上三通管，一侧与血压描记装置连接描记血压，另一侧连上放有肝素（约0.1g）的50ml注射器，并暂时夹闭导管，以备放血用。

6.将颈外静脉插管连接水减压计的细塑料导管（导管内充满含肝素生理盐水）。导管的外端用三通管连上输液瓶和水减压计，用以测中心静脉压和输液。在测压前，阻断减压计侧管， 使导管与输液瓶相通， 缓慢输入生理盐水（5滴~10滴／min），保持静脉通畅。 7.行输尿管插管术。用记滴器记录每分钟排尿的滴数。

8.在右侧腹直肌外缘作长6cm纵行的中腹部切口，钝性分离肌肉，打开腹腔后，推开大网膜，找出一段游离度较大的小肠肠袢，轻轻从腹腔拉出，放置在微循环恒温灌流盒内，用显微镜观察肠系膜的微循环。

9.放血前观察动物的各项生理指标，包括一般情况、皮肤粘膜颜色、肛温、血压、呼吸、心率（快放记录纸）、中心静脉压、尿量、肠系膜微循环等，并作记录。 附：中心静脉压的测量方法

⑴从颈外静脉插入静脉导管，应插到上腔静脉入右心房入口处（相当于锁骨下1cm~2cm），插入导管长度为5cm~8cm，并经三通管与输瓶和水检计相连。 ⑵测压前使输液瓶内生理盐水灌满水检压计，检压计\点刻度与心脏水平一致。 ⑶测压时应阻断与输液瓶相通的侧管，使水检压计与静脉导管相通，观察水检压计内液面逐渐下降到某一刻度时不再下降，此时液面随呼吸上下波动，读取此时的液面刻度，即中心静脉压。 ⑷测完压力后，再使检压计内充满生理盐水，然后阻断与检压计相通的侧管，使输液瓶与静脉道管相通，维持慢速输液（5滴~10滴／min），维持道管通畅。 附：肠系膜微循环的观察 ⑴向恒温水浴灌流盒内注入38℃的灌流液（台氏液加入1%明胶配成）。 ⑵选择一段游离度大的小肠袢，从腹腔内拉出后放入恒温灌流盒的水浴槽内，使肠系膜均匀地平铺在有机玻璃凸形观察环上，压上固定板，调整灌流盒的液面，使液面刚覆盖过肠

系膜，用透射光源或侧射光源在生物显微镜下观察。 ⑶在镜下选好视野，分清肠系膜各种血管，包括动脉、静脉和毛细血管（仅能通过一个红细胞的血管）。观察血流速度，血管口径（可用测微器测定）及视野下某一固定区域内毛细血管管袢数目，找出标记血管，以便固定视野作动态的前后比较，也可用显微镜电视进行动态观察。

10.打开颈总动脉插管与注射器相连的侧管，使血液从颈总动脉流入注射器内，一直放血至血压降到5.3kPa（40mmHg）时，调节注射期内放出的血量，使血压稳定在低水平上。 11.使血压维持在5.3kPa15~25min，观察注射器中血量的增减，失血期间动物各项生理指标（同步骤9）改变，以及肠系膜微循环改变。

12.停止放血，将注射器内的血液注入输液瓶内，快速从静脉输回原血和失血量等量的生理盐水（50滴／min）进行抢救，输血、输液再复查动物的一般情况及各项生理指标和微循环是否恢复正常。可根据休克的病理生理改变，自行设计抢救方案，再观察抢救效果。 ㈤注意事项

1.麻醉要深浅适度，以免因疼痛刺激导致神经源性休克。 2.尽量减少手术出血。

3.牵拉肠袢要轻，以免引起创伤性休克。

4.动脉套管和注射器中，操作前应加一定量的肝素。静脉导管一经插入，应立即缓慢滴注生理盐水。

5.本实验因手术较多，宜几个人分工协作，以保证实验成功率。 ㈥思考题

1.兔失血性休克模型怎样制备？

2.失血性休克时兔有哪些表现？微循环有什么变化？ 3.失血性休克发生主要机制是什么？

五、肝性脑病

【实验目的】

1、掌握氨中毒复制肝性脑病动物模型的方法。 2、探讨氨在肝性脑病发生机制中的作用。 【实验原理】

肝性脑病是继发于严重肝病的神经精神综合征。有关肝性脑病的发病机制有很多学说，其中之一是氨中毒学说。该学说认为由于肝细胞严重受损，使血氨生成增多而清除不足时，可使血氨增高。增多的血氨通过血脑屏障进入脑组织，通过干扰脑的能量代谢，使脑内神经递质发生改变以及抑制神经细胞膜等作用，引起脑的功能障碍，病人从而出现相应的症状和体征。本实验通过肝大部分结扎的方法，人为地阻断肝脏的血流，造成肝细胞功能急性损伤，在此基础上再经消化道输注复方氯化铵溶液，使血氨水平明显升高，从而出现抽搐、昏迷等类似肝性脑病的临床症状。 【实验对象】 家兔 【器械与药品】

常规手术器械，兔固定台， 50ml 注射器，细导尿管，棉线

1% 普鲁卡因，复方氯化铵溶液（含 2.5% 氯化铵， 1.5% 碳酸氢钠， 5% 葡萄糖），生理盐水

【步骤与方法】 1、取家兔一只，称重后仰卧位固定在兔台上，剪去腹部正中的被毛，沿上腹部中线用 1% 普鲁卡因做局部浸润麻醉。 2、自胸骨剑突下，沿腹正中线作一长约6~8cm 左右的切口，分层局麻，钝性分离皮下组织，沿腹白线剪开腹壁，打开腹腔，暴露肝脏。用左手指腹向下轻压肝脏膈面，可见在肝与膈肌之间有一薄而透明、呈三角形的镰状韧带，小心将其剪断，以增加肝脏的游离度。观察正常的肝脏颜色，探查家兔肝脏的叶数。

3、急性肝功能不全动物模型的制备——肝大部结扎：棉线用生理盐水浸湿后，沿肝左外叶、左中叶、右中叶和方形叶之根部围绕一周并结扎，以阻断大部分肝血流，造成家兔急性肝功能不全。由于右外叶和尾状叶之间门脉血管为独立分支，不会同时被结扎，因而得以保留。待上述肝叶变成暗褐色后用眼科剪在已结扎的肝叶上剪一小口，如无明显渗血，说明肝大部结扎成功，否则就要重新结扎。4、十二指肠插管：沿胃幽门向下找出一段十二指肠，在肠管下方血管稀疏处，用止血钳穿透肠系膜并穿两根线备用。用眼科剪在肠壁上剪一小口，将细导尿管顺远胃端方向插入肠腔约 6cm，直接连肠管一起结扎固定，防止插管脱落。近胃端也应用线结扎，以防胃内容物流出。然后将肠送回腹腔内，细导尿管另一端置于腹腔之外，用止血钳夹住腹壁，关闭腹腔。

5、观察、记录家兔的一般情况、呼吸、角膜反射、四肢肌张力及对刺激（敲打兔台或用针刺）的反应。

6、制备肝性脑病动物模型：用注射器每间隔 5 分钟向十二指肠插管注入复方氯化铵溶液 5ml ，仔细观察家兔呼吸、肌张力等指标的变化，当出现全身性抽搐时停止注射。停止注射。记录出现痉挛的时间和所灌注复方氯化铵溶液总量，并计算每公斤体重的用量（kg/ml）。 7、对照组：另取家兔一只，称重后固定于兔台上，腹部正中切口，打开腹腔，行肝大部结扎及十二指肠插管，术后每隔 5 分钟向十二指肠内注入 5ml 生理盐水，观察动物有无异常，并与注入复方氯化铵溶液的实验家兔进行比较分析。 【注意事项】

1、游离肝脏和剪破镰状韧带的动作应准确、轻柔，以免肝叶破裂出血和损伤膈肌造成气胸；结扎肝叶应尽量靠近根部肝门处，以防拦腰结扎肝叶造成出血；结扎线松紧要适度，过紧可

能造成肝叶撕裂而出血，过松达不到阻断血流的目的。

2、十二指肠插管要插入一定深度，必须牢固固定，因家兔并为全身麻醉，以防实验中家兔挣扎或剧烈抽搐时插管滑脱，复方氯化铵溶液漏入腹腔。

3、关闭腹腔前，检查液体注入管道是否通畅，有无渗漏。（先推注5ml后再关闭腹腔） 4、动物经输入一定量氯化铵后，一般会出现抽搐，但由于动物未做全身麻醉，实验期间可能出现挣扎，误判为抽搐。故实验中要注意与氨中毒抽搐的鉴别。 【思考题】

1、从肠道注入复方氯化铵溶液为什么可使家兔的血氨升高？

2、灌注复方氯化铵溶液后，家兔的呼吸如何变化？如何解释这些变化？ 3、家兔氨中毒后，发生昏迷的机理是什么？

4、给家兔体内注入复方氯化铵溶液后,家兔出现痉挛的机制是什么？ 5、肠道灌注生理盐水的家兔是否出现异常表现？其实验结果有何意义？ 6、为什么本实验注入的是复方氯化铵制剂？

7、你对本实验的实验设计思路、方法与步骤安排及救治原理设计等，有什么更好的想法与建议？

六、高钾血症

【实验目的】

1、掌握家兔高钾血症模型的复制方法； 2、观察高钾血症家兔心电图变化的特征； 3、了解血钾升高后，对心肌细胞的毒性作用；

4、通过实验进一步了解高钾血症产生的原因、机理和抢救措施，并比较各抢救治疗方案的效果。

【实验原理】

血钾浓度升高可对心肌细胞产生毒性作用，干扰正常心肌细胞的电生理活动，引发多种心律失常，尤其是心室纤颤和心跳骤停。本实验旨

在通过静脉给钾，复制高血钾症，通过观测心电图变化，了解高血钾症对心脏的影响。 【实验对象】家兔(雌雄不限)

【器材与药品】 20％乌拉坦，生理盐水，5％及10％氯化钾生理盐水溶液，4％碳酸氢钠溶液，5％氯化钙溶液，30％葡萄糖溶液

婴儿秤，兔手术台，BL—410生物实验系统多媒体，心电针形电极，输液装置一套，手术器械一套，气管插管,5ml、10ml、20ml注射器。 【步骤与方法】

l、称重、麻醉和固定动物 家兔称重后，经耳缘静脉缓慢推注20％乌拉坦(5ml／kg))行全身麻醉，仰卧位固定于兔台上。

2、心电描记：标II导联导线连接的方法：在动物四肢远端显露部位分别用金属注射针头刺入皮下(不能刺入肌肉，以防止肌颤的干扰)，进针约2cm。按右前肢(白)，右后肢(黑)，左后肢(红)的顺序联接，电极另一端连接计算机的任一通道。

打开BL．410系统，在―输入信号‖菜单中相应通道选中―心电‖，启动实验，描记实验前正常心电图，观察心电波形：区分P、QRS主波波群以及T波。观察记录输入氯化钾前的心电。观察过程中，做好标记，如：―正常‖、―注射5％KCI第一次‖等，以便于比较分析。 3、颈部手术：(1)气管切开术；(2)颈外静脉插管术：缓慢输入生理盐水，(5～10滴／min)，以保持管道通畅

4、高钾血症的复制(耳缘静脉推注法)以lml／min速度经耳缘静脉缓慢推注5％氯化钾溶液lml／kg，间隔5分钟再推注同等剂量氯化钾共3次。然后每间隔5min推注10％氯化钾溶液1ml／kg共3次。注射氯化钾的过程中，注意观察心电图波形的变化规律。观察到高血钾的心电图异常改变(高尖T波，P波低平、增宽，QRS波群低压变宽，出现心室扑动或颤动)后，立即停止注射，并开始实施抢救措施。

5、高钾血症的抢救在滴注氯化钾生理盐水溶液之前，必须选择和准备好抢救药物，包括：(1)单独用30％葡萄糖溶液静脉缓慢滴注；(2)4％碳酸氢钠5ml／kg快速静脉滴注，严重者可缓慢静脉注射；(3)5％氯化钙2 ml／kg缓慢静脉推注。 事先选择好耳缘静脉输注通道，在心电图出现典型高血钾改变后立即实施抢救，通过耳缘静脉快速注入抢救药物。如果10秒内无法输入抢救药物，救治效果欠佳。实施各项抢救项目，同时观察心电图恢复状态。

6、致死作用观察 当心电图基本恢复正常后，迅速打开胸腔，暴露心脏，肉眼直接观察心脏活动情况。静脉推注致死剂量的10％氯化钾(3ml／kg)，边注射边观察心电波形的改变，出现室颤或成一直线时停止注射，观察心室纤颤及心脏停搏时的状态。

【实验结果记录】 注射前 注入KCl 严重心律失常 4%NaHCO3溶液 抢救 5êCl2溶液 30%葡萄糖溶液 心电图变化特点 10%KCl致死作用观察 【注意事项】

1、动物麻醉深浅要适度，麻醉过深易抑制呼吸，过浅时动物疼痛则易引起肌肉颤动，对心电图记录造成干扰。

2、保持静脉导管的通畅，确保各种液体能及时，准确地输入。

3、针型电极剌入部位要对称，位于皮下，导线避免纵横交错，实验台上的液体要及时擦拭干净。由于动物的个体差异，有时T波会融合在ST段中而不呈现正向波，很难观察到典型的高尖T波，需要更换动物。若记录心电图时出现干扰信号，应及时找出原因并排出干扰。 4、严格控制推注KCI溶液的浓度、速度，必须缓慢、匀速推注，要随时观察各项指标的变化。当各项指标急剧变化时，应减慢速度。如发现动物突然挣扎或呼吸急促，要立即停止注射。防止滴入速度太快导致动物突然发生心室纤颤而死亡，动物对注入氯化钾溶液耐受性有个体差异，有的动物需注入较多的氯化钾才出现异常心电图改变，遇到这种情况时，应适当调整注入氯化钾的浓度和间隔时间。

5、电极用毕用75%酒精擦净，以保持良好的导电状态。 【讨论思考题】

l、血钾升高会出现哪些心电图变化?发生机制是什么?用相关理论加以说明。 2、分析你所选择的药物抢救高钾血症的机制。它们是否都能降低血钾的浓度? 3、严重高钾血症使心脏停搏在何种状态?为什么?

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