噬菌体展示技术在食品安全检测中的应用(2)

基酸。以其中P10噬菌体阳性克隆建立竞争ELISA方法，线性范围为500~2000pg/ml，检测下限为50pg/ml。成功应用噬菌体展示技术筛选出AFB1的模拟抗原表位，建立了无需人工抗原的免疫学分析方法。

2007年，陈琳等[26]利用噬菌体展示技术，以幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori, HP)空泡毒素(VacA)基因片段作为固相筛选分子，筛选幽门螺杆菌VacA基因结合蛋白，探索VacA致病机制，研究VacA致病机制，为HP疫苗的研制和治疗等提供依据。

近年来，有许多运用噬菌体展示技术将模拟表位成功的展示于噬菌体表面的

报道[27,28]。2011年[29]，陈兴龙等通过噬菌体展示技术展示赭曲霉毒素A(ochratoxin A，OTA)模拟表位。将带有OTA模拟表位序列的寡核苷酸双链克隆至载体pC89-COTA。利用噬菌体展示技术，通过优化辅助噬菌体感染复数、IPTG加入的时间与剂量等培养条件获得表达有高密度OTA模拟表位的噬菌体。再通过酶联免疫吸附检测(ELISA)方法比较不同的条件下的表达效果，探索最优表达条件。成功获得高密度表达OTA模拟表位的噬菌体，并发现辅助噬菌体感染复数与IPTG加入量对模拟表位表达量影响不大，IPTG加入时间对模拟表位表达量有较大影响。同时，通过在噬菌体表面展示OTA模拟表位，可以生产大量廉价无毒的OTA模拟表位噬菌体，为以后建立OTA的无毒ELISA分析方法提供稳定可靠的材料来源。

2.7 化学农药

2003年，Bricheta等[30]从构建的天然抗体库中筛出除草剂2,4-D的抗体。 2011年，贺江等[31]将甲氧基有机磷农药通用半抗原(S-羧甲基-O, O-二甲基二硫代磷酸酯，CMP)连接至琼脂糖凝胶，进而对甲氧基有机磷农药广谱特异性抗体进行纯化，以纯化抗体为固相抗原，以人源scFv抗体库(Tomlinson I + J)为抗体源，进行抗独特型抗体的筛选；利用所筛选到的抗独特型抗体建立非竞争免疫检测技术。经过鉴定，成功制备了甲氧基有机磷农药的β型和α型抗独特型抗体，并以此为基础建立了非竞争检测技术体系。

3 展望

噬菌体展示技术经过20多年的发展，已成为生化分析中备受关注的研究分析工具。同时由此而发展出的一些其他方法也被广泛应用于各个领域。近几年，随着分子生物学和分子免疫学的不断突破和噬菌体展示技术的不断改进，其在食品微生物安全检测的应用前景将更为广阔。各种单克隆抗体的不断问世，大大提高了噬菌体展示文库的多样性。通过利用不同的噬菌体抗体库和噬菌体肽库，食品

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中各种微生物、毒素、农药等的快速鉴定及其含量的测定等都将成为现实。然而在未来的一段时间内，噬菌体展示技术的发展主要依赖于建立高度复杂性的展示文库、提高展示效率、改善筛选方法提高筛选效率、展示更多顽抗蛋白以及拓宽噬菌体展示文库的化学空间等方面。

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