江苏大学-环境工程-实践总结(2)

多糖、淀粉、粗纤维、膳食纤维等碳水化合物类检测；脂肪和脂肪酸分析，棕榈酸、硬脂酸、肉豆蔻酸等饱和脂肪酸的定性定量测定。

其中食品中蛋白质含量的测定：原理以硫酸铜为催化剂，用浓硫酸消化试样，使有机氮分解为氨，与硫酸生成硫酸铵。然后加碱蒸馏使氨逸出，用硼酸溶液吸收，再用盐酸标准滴定溶液滴定。根据盐酸标准滴定溶液的消耗量计算蛋白质的含量。

固体、粉状、糊状、固液体试样：称取0.5～5g试样（使试样中含氮30～40mg），精确至0.001g，放入凯氏烧瓶中（避免粘附在瓶壁上）。向凯氏烧瓶中依次加入硫酸铜0.4g、硫酸钾10g、硫酸20mL及数粒玻璃珠。将凯氏烧瓶斜放在电炉上，缓慢加热。待起泡停止，内容物均匀后，升高温度，保持液面微沸。当溶液呈蓝绿色透明时，继续加热0.5～1h。取下凯氏烧瓶冷却至约40℃，缓慢加入适量水，摇匀。冷却至室温。向接收瓶内加入50mL4%硼酸溶液及4滴甲基红-次甲基蓝混合指示液。将接收瓶置于蒸馏装置的冷凝管下口，使冷凝管下口浸入硼酸溶液中。将盛有消化液的凯氏烧瓶连接在氮素球下，塑料管下端浸入消化液中。沿漏斗向凯氏烧瓶中缓慢加入70mL40%氢氧化钠溶液（使漏斗底部始终留有少量碱液，封口）。加碱后烧瓶内的液体应为碱性（黑褐色）。通入蒸汽，蒸馏20min（始终保持液面沸腾）。至少收集80mL蒸馏液。降低接收瓶的位置，使冷凝管口离开液面，继续蒸馏3min。用少量水冲洗冷凝管管口，洗液并入接收瓶内，取下接收瓶。用0.1mol/L盐酸标准滴定溶液滴定收集液至刚刚出现紫红色为终点。同一试样做两次平行试验，同时做空白试验。

3.功能成分检测

胡萝卜素、黄酮类、虾青素、芦丁、内酯类等生物抗氧化成分检测；多酚类：总茶多酚、原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素、没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、鞣花酸；大蒜素、齐墩果酸、熊果酸、绿原酸、等活性成分检测；

3.1总黄酮的测定

实验原理：中草药及其他植物原料营养保健食品中含有黄酮类物质，此类物质，经过提取，净化后与铝离子反应生成稳定的绿色化合物，以芦丁为标准品使用分光光度计在510nm处测定含量。样品提取：食物样品经过风干后，粉碎过60目筛，于60℃恒温干燥6h，准确称取5-10g，放索氏提取器中加入100ml石油醚，恒温水浴锅加热回流脱脂3h，换上新的球形瓶，然后用100ml甲醇提取7h，将甲醇提取液于旋转蒸发器减压蒸馏，将甲醇蒸发至恰好蒸干为止，立即取下，用30%乙醇溶解后，小心转入10ml容量瓶中，以下同标准曲线的制作。精密称取芦丁标准液0，1，2，3，4，5ml，分别于10ml容量瓶中，各加入30%乙醇使之为5ml，加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml，放置6min，加入10%硝酸铝0.3ml，放置6min，

再加入2ml 1 mol/l 氢氧化钠，混匀，用30%乙醇稀释至刻度，摇匀放置10min后，于510nm处进行比色测定其吸光度，试剂为空白参比，用最小二乘法得线性回归，得回归曲线。结果计算：总黄酮含量(mg/100g)=C*V2/V1*100/W

其中，C为从回归方程中求得试样检液含量；V2样品定容体积；V1吸取测定样液体积；W称取样品重量

3.2龟苓膏中绿原酸的测定

龟苓膏是以凉粉，土茯苓，乌龟，蒲公英和金银花为主要原料，采用特定工艺制成的即食龟苓膏食品，采用高效液相色谱法测定。

试剂：绿原酸标准品，甲醇(色谱醇)，高纯水，无水乙醇 仪器：高效液相色谱仪，UV检测仪，超声波仪

色谱条件：色谱柱：C (250mmX4.6mm)；温度：室温；流动相：乙睛-0.4%磷酸溶液；流速：1.0ml/min；进样量：20ul

标准曲线的配制：精密称取绿原酸标准品适量置棕色瓶中，加甲醇制成10μL/ml的溶液，即得标准溶液，吸取标准溶液5.0，10.0，15.0，20.0，25.0，注入高效液相色谱仪，测定其峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，求回归方程。试样溶液的制备：取膏体试样适量，搅拌成浆，精密称取25g，置于100ml容量瓶中，加无水乙醇定容至100ml，称量，超声处理20min，放冷，补无水乙醇至处理前质量，摇匀，放置，分取上清夜用漏斗过滤，备用。取所制得的上清夜25ml，水浴挥干，加适量甲醇溶解，移置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得试样溶液。

结果计算：X2=M4*10*100/(25/100*M3*1000)

其中，X2：试样中绿原酸mg/100g；M4：由标准曲线计算出的被测溶液中绿原酸含量μg；

M3：试样质量g

有机磷和有机氯农药残留量的测定 4.1有机磷农药残留的检测

样品有稻谷、玉米、小麦(样品必须低温保存)，称量时(样品应常温)，应首先把天平擦干净，避免干扰，在称样前，要将样品充分混匀，为了防止风的吹动而影响称量，在称量前需关上门，准确称取10.00g试样置于100ml具塞三角瓶，并及时标记，由于试样过多，试样称完后需要做好记号便于区分试样，同时也应准确称取0.5g中性氧化铝于锥形瓶中(中性氧化铝应储存于干燥器内备用)，另外玉米、小麦样品还需要加0.2g活性炭，然后再把锥形

瓶拿到通风橱里加二氯甲烷(二氯甲烷易挥发有毒),而加入的二氯甲烷必须用重蒸过的二氯甲烷，每天到的第一件事就是重蒸二氯甲烷，用移液管准确的吸取20ml二氯甲烷于锥形瓶中，在盖瓶塞时，应防止二氯甲烷挥发而使瓶塞冲去摔碎，加完后放到平震荡器中振荡30分钟，振荡速度以100转/分左右为宜，在使用振荡器时，老师教会了我们如何设置、使用振荡器，振荡完毕后，需要过滤，过滤时最好使用试管架便于小试管的放置，小试管应选用具有刻度并带盖的小试管(有机磷测定使用的小试管需用丙酮润洗且所有的实验器具需在干燥的情况下使用)，滤纸应用多折中速定性滤纸过滤，且开始的3--5滴滤液应弃去，然后收集滤液5ml，滤液收集后需浓缩(小试管盖可盖也可不盖)，利用氮气浓缩时，应注意防止每支试管浓缩速度不一致少于0.5ml,若不足0.5ml应用二氯甲烷准确定容到0.5ml,浓缩后就送到气相色谱仪检测(由于气相色谱仪器非常昂贵，检测时是由指导老师亲自检测)。结果计算：x=cv/m，x-样品的农药残留量，mg/kg，c-由峰高或峰面积从标准曲线上查上的样品溶液中的农药浓度ug/ml，v-样品溶液的体积ml，m-样品的称样量g，样品测定峰高或峰面积，与标准比较定容。 试剂的储存：样品前处理：①样品经粉碎机粉碎，合并筛上，筛下部分，混均后供分析。②中性氧化铝：在550℃灼烧4h，用前于130℃复烘5h,加5%水脱活，储存于干燥器内备用。③活性炭：层析用20--40目，将活性炭放入浓盐酸中，加热煮沸1h，用蒸馏水洗至中性，烘干后，放入带盖瓷皿内，盖上皿盖，在550℃灼烧2h，用前在105℃烘烤4h,储存于干燥器内备用。④丙酮：向丙酮中逐次加入少量高锰酸钾进行回流，直至紫色不褪为止，然后蒸馏，收集沸程为55--57℃的馏分，置于棕色瓶中密闭保存。④二氯甲烷：一般二氯甲烷可以直接重蒸馏，收集沸程为39--41℃的馏分(为了除去杂质)置于棕色瓶中避光保存。⑥石油醚：石油醚直接蒸馏，收集沸程30--60℃的馏分(为了除去杂质)置于棕色瓶中避光保存。

4.2有机氯农药残留的检测

样品同样也是稻谷、玉米、小麦，也应准确称取2.00g粉碎试样于100ml具塞三角瓶中，然后在通风橱内加入20ml石油醚，用移液管准确的吸取20ml的石油醚于锥形瓶中(也应防止石油醚挥发而使瓶塞冲出去摔碎)然后置于振荡器中振荡30min，过滤时应收集全部的滤液于浓缩瓶中(滤纸为多折快速定性滤纸)，过滤后应用约10ml的石油醚分次洗涤漏斗和滤纸并合并所有的滤液，然后进行浓缩，浓缩时，水温应在38--40℃之间，浓缩滤液不能蒸干，否则会导致回收产降低，然后定容(定容时，必须选用具有刻度并带盖的小试管)，浓缩瓶转移到小试管后还应对浓缩瓶、漏斗进行洗涤(应遵循少量多次)并对所有器具进行一一对应标记，浓缩定容到5ml后，最后进行检测，结果计算：x=cv/m，x-样品的农药残留量mg/kg，

c-由峰高或峰面积从标准曲线上查上的样品溶液中的农药浓度ug/ml，v-样品溶液的体积ml，m-样品的称样量g。 粮食中有机磷农药残留量的测定方法和原理是综合gb/t50009.20--XX食品中有机磷农药残留量的测定(第二法)和gb/t5009.145--XX植物性食品中有机磷和氨基甲酸酯类农药多种残留的测定方法，并作部分改动，检验流程：分样→样品粉碎→提取→净化→浓缩→上机测定→结果计算。粮食中有机氯农药残留量的测定方法是采用gb/t5009.19--2011第二法，气相色谱分析采用毛细管色谱柱进行，原理是试样中六六六、滴滴涕经石油醚提取，浓硫酸磺化去杂后用气相色谱法对不同异构体和代谢物分别测定，与标准比较定量，检验流程：分样→样品粉碎→提取→浓缩→净化→上机测定→结果计算。 以上讲了有机磷农药和有机氯农药残留的测定，现在就来讲讲玻璃器皿的清洗与存放。过滤后就应把器皿浸泡在洗涤液水中，便于洗去器皿的标记。由于二氯甲烷、石油醚是易发挥，有毒气体，在清洗玻璃器皿时应带上手套，先把玻璃器皿用洗液冲泡，然后再毛刷把玻璃器皿里外都洗刷干净，再反复用自来水冲洗干净彻底(为了防止洗涤液残留而影响农药的检测)。容量瓶洗干净以后应放在物架上晾干，以便再用(定容有机磷溶液的小试管应用丙酮润洗2--3次)，所有玻璃器皿在用之前都应该是干燥，冷却。指导老师还利用空余的时间给我们讲了气相色谱仪和液相色谱仪，也教我们怎么用，让我知道了进样时最好按照空气--样品--空气进样，气相色谱仪沸点低，易气化；气相色谱和液相色谱可以从图上分开来，气相色谱的峰都比液相色谱高，气相进样液分分流与不分流进样，分流进样是打进去后色谱仪会自动给分开，不分流进样是直接进入，气象色谱仪一般以氮气为载体。

三、实践计划执行情况

请写明计划执行起止时间 2015.10.3——2015.10.28 主要参观实验室了解实验室的规章制度，学习实验室中一些设备的操作，主要是高效液相色谱仪，质谱仪和薄层色谱；最重要的是实验数据的记录 2015.10.31——2016.11.25 主要学习食品中一些营养成分的检测，最后自己亲手做了食品中蛋白质含量的检测。 2015.11.30——2015.12.25 主要学习食品中一些功能成分的检测，最后自己亲手做了总黄酮以及绿原酸成分检测。 2016.3.1——2016.3.31 食品中有机磷和有机氯农药残留量的测定 2016.4.1——2016.4.28 实验质谱图谱分析 四、 实践主要成果

实践主要成果： 通过实习，我对食品检测分析方面的专业知识有了较深入的认识，加强了理论与实际，理论与生产相结合，拓宽了视野，进一步巩固了我的专业理论知识，综合运用所学知识分析和解决实际问题的能力也有了较大提高，实践和创新能力有了一定体现，已基本熟悉食品检测、分析基本方法，能独立完成相关的检测任务。例如独立完成了食品营养成分蛋白质含量的检测，功能成分总黄酮绿原酸的检测，有机氯及有机磷农药残留的检测；还学会了高效液相色谱仪，质谱仪的操作及图谱数据的分析。

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