目的 研究不同植物生长调节荆组合和浓度配比对诱导福建金线莲丛(2)

1 基因型

植物组织培养成功与否在很大程度上受基因型的影响。不同基因型植物的离体培养条件不同，外植体对培养的反应如不定芽发生时间、途径以及发生率差异也很大。赵秀娟等用10种黄瓜材料为研究对象，发现基因型间的再生能力差别较大，不定芽再生率低的只有10%的，高的可以达到80%。杜胜利等用12个不同基因型黄瓜品种进行试验，不定芽再生率最高可达73%，最低只有25%。Abrie等利用西葫芦和笋瓜获得了高效再生植株，但有3个品种在任何培养基上均未形成再生器官，而笋瓜品种Chicago Warred却发生了胚胎途径的再生，Hales Best 36品种在所有的含有细胞分裂素的培养基上都能形成芽，表现了较强的基因型差异。Todd等测试了85个基因型的黄瓜子叶外植体在MS+1 mg/LBA+1 mg/L NAA培养基上不定芽的发生情况，只有4个基因型的子叶外植体有不定芽发生。 2 外植体类型与部位

瓜类蔬菜器官组织培养研究中外植体的种类很多，如子叶、子叶节、茎尖、下胚轴、真叶等等。但不同的外植体或相同外植体不同发育阶段的不定芽诱导率差异明显。李贞霞等用相同培养基对黄狼南瓜胚根、胚轴和子叶分别进行愈伤组织的诱导，结果认为子叶是南瓜诱导愈伤组织的最适外植体，胚根次之，胚轴的诱导效果最差。何晓明等对津绿4号黄瓜的子叶和下胚轴作为外植体诱导再生植株的研究表明，下胚轴诱导的愈伤组织不能分化出芽，部分产生白色不定根，而子叶出芽率为30%。甜瓜组织培养研究中，不同基因型品种的幼嫩子叶都可得到较高频率的再生不定芽，而真叶、下胚轴、茎尖等部位再生频率很低，甚至不能再生。由于农杆菌介导的转化方法对植物再生频率要求较高，所以，在瓜类蔬菜遗传转化的研究中，多采用再生频率较高的子叶、子叶节或者子叶柄作为为外植体。

同一外植体不同部位不定芽诱导率与诱导方式也有差异。赵建萍对艾西丝南瓜的再生研究表明，子叶不同部位的切块虽均能高频率地诱导出愈伤组织，且诱导率达53.3%-100%，但唯有子叶基部临近下胚轴-端切口边缘有不定芽的分化。这与王春霞等对京欣1号西瓜子叶进行芽分化试验的结果一致，表明子叶的不同部位再分化能力并不相同。余义和等认为，以子叶作为外植体可以通过愈伤组织途径之后形成再生植株，而以子叶节作为外植体可以直接诱导不定芽形成再生植株。马国斌等[18]的研究表明，西瓜和甜瓜组织培养中，子叶和真叶外植体切块形态学下端部位总是首先大量发生愈伤组织或分化出器官，而切块形态学上端部很少或几乎不发生愈伤组织或器官。可见，多数研究均表明，子叶的形态学下端与子叶节在离体培养中更容易诱导出芽且诱导率较高。 3 外植体生理状态

不同生理状态的外植体分化率差别很大。多数研究中以无菌苗生长天数作为外植体生理状态的衡量依据：Dong和Compton等的研究认为，5d苗龄幼苗子叶的不定芽发生频率最高：赵建萍等在研究艾西丝南

瓜子叶离体培养时发现，4-5d苗龄子叶不定芽诱导率最高，随苗龄的增加或减少芽的分化率均迅速降低。宋道军等研究认为苗龄3d左右的西瓜基端子叶最易于再生。而黄学森、王果萍等的研究表明，当西瓜子叶刚刚由黄变绿大概5d苗龄时不定芽发生率最高。但从众多研究结果可以看出，相同种类瓜类蔬菜适宜分化的苗龄并不一致。这可能是由于培养条件和基因型等差异导致不同品种的种子发育快慢不同。所以，以子叶颜色判断外植体生理状态可能更为有效。张志忠等对西瓜高频再生体系的研究中认为无菌苗子叶呈淡绿色时不定芽诱导率最高，颜色发黄或已变为深绿色的子叶分化效果较差，这与Dong、黄学森、任春梅及王果萍等的报道均是一致的。 4 基本培养基

同种植物、相同外植体选用不同的基本培养基，不定芽诱导率不同。瓜类蔬菜器官途径组织培养大多选择MS培养基为基本培养基，少数应用改良型MS培养基或其他培养基，如Miller、B5、LS等。于喜艳等在研究甜瓜子叶离体培养时选用改良的Miller培养基获得了较高的不定芽诱导率。王春霞等以子叶为外植体选用MSA培养基也得到了较高的不定芽诱导率。邓向东等发现LS培养基对哈密瓜的不定芽诱导效果较好。

5 生长调节剂的种类及配比

采用瓜类蔬菜器官组织培养诱导不定芽常用的细胞分裂素是BA，生长素中常用的是IAA、NAA和IBA，也有部分研究应用ZT、KT、2,4-D等激素。生长凋节剂种类及其配比是影响植物细胞脱分化和再分化的关键因素之一，特别是细胞分裂素与生长素的比例搭配，直接影响细胞分化方向及研究成败。由于离体培养中基因型及外植体的依赖性，以致不同品种、不同类型、同品种不同部位，甚至不同研究者所获得的适宜培养基电不尽相同。李贞霞等以黄狼南瓜为试材进行芽诱导试验的结果表明，MS+1.0mg/L BA+0.05 mg/L NAA为最适培养基；余义和等使用相同试验材料研究则认为MS+1.0 mg/1.6-BA+0.5 mg/L NAA为最适芽诱导培养基。赵建萍以IAA 0.4 mg/L分别与BA 0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mg/L进行配比，对艾西丝南瓜进行芽诱导，结果表明，BA在2.0-8.0 mg/L均可诱导不定芽，以4.0 mg/L效果最佳，低于1.0mg/L时不能诱导出芽，而由切口处分化出少量新叶，难以发育成正常植株，梅茜等对津研4号黄瓜芽诱导研究结果显示，BA质量浓度低于0.5 mg/L时，完全不能诱导不定芽的形成；BA为1.0 mg/L时，最适合芽再生；高于此质量浓度，不定芽再生率反而下降，刘春香等以黄瓜品种LS-21为试材所进行的研究表明，6-BA(1.2-1.6)mg/L+IAA 0.2 mg/L，芽分化频率均较高。另外，不同激素诱导效果也有很大差异，邓向东等对网纹香和S-24 2个甜瓜品种应用了6-BA、ZT、KT、2ip、2,4-D 5种激素进行诱导，其中6-BA诱导效果最好。

多数研究认为，当不定芽伸长至2-3cm时即进行生根培养。NAA、KT、IAA和IBA都能明显促进再

生植株生根。蔡润等将古拉巴等8个甜瓜品种再生芽在1/2 MS+IAA 0.02mg/L培养基中生根,生根率可达91%,驯化成活率在90%以上，苏永全等以甜瓜品种黄河蜜3号为材料。认为在1/2MS+IAA 0.20 mg/L 的培养基上生根效果最好,生根率达100%。褚剑峰等用高质量浓度的生长素液浸泡西瓜和甜瓜再生芽后，在1/2 MS+IBA 0.8 mg/L的生根培养基上生根率较高，且用质量浓度60mg/L NAA液浸泡处理生根率最高。南瓜和黄瓜诱导生根时大多数采用1/2 MS培养基，也有附加不同激素的培养基。余义和等研究认为，诱导黄狼1号南瓜不定根的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5mg/L IAA。

综合不同学者的研究发现：生长调节物质的种类与浓度使用范围较广、不同瓜类与品种所选择的激素种类与浓度差异很大。所以，不同基因型作物进行离体培养时，均应设置不同激素种类浓度梯度进行试验摸索，以选择最佳诱导激素与浓度配比。 6 碳源与其他添加物

瓜类蔬菜离体培养研究，培养基中基本采用蔗糖作为碳源，对不同碳源的比较试验尚未见报道。蔗糖添加量多为0.3%。也有不同报道：余义和等在南瓜离体培养中利用的蔗糖浓度为0.2%，但结果差异不显著。邓向东等试验发现，提高培养基中的蔗糖浓度对提高哈密瓜不定芽诱导率有促进作用，但其效果因哈密瓜品种不同而差异显著。陈学军等认为，含较低浓度蔗糖的分化培养基对西葫芦胚珠再生芽的诱导效果优于较高浓度的。另外，有很多报道培养基中适当添加AgNO3可促进不定芽再生。梅茜等研究表明，添加2.0mg/L的AgNO3时，黄瓜芽诱导率比对照高出1倍。也有不同报道：赵军良等在黄瓜子叶离体培养研究的培养基中加入1-4mg/L的AgNO3或0.1-0.3mg/L的GA3，结果发现，所有的外植体只大量长根，无芽分化，而且随着培养时间的延长，外植体逐渐变黄死去。田长恩等研究发现，培养基中附加BR会抑制甜瓜子叶离体培养中不定根和不定芽的诱导再生，但对不定根的抑制作用不同于不定芽。

总之，瓜类蔬菜离体培养过程影响因素很多，培养条件如温度、光照，培养过程中的光、暗处理，外植体大小、切割方式、放置方向，继代时间间隔等均可影响到诱导分化率。但目前有关这方面的研究报道较少，其影响的程度和机理还有待于继续研究探讨。

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