南京农业大学生物化学习题册(有答案)

试问：（1）用什么溶剂稀释果汁为好？理由是什么？

（2）用什么方法测定Vc含量？原理是什么？

7．简述：（1）从酵母中提取核酸粗制品的操作过程。 （2）鉴定RNA、DNA的方法及原理。

（3）将某种核酸混合液中的RNA与DNA分离的方法及原理。

8．（1）请以丙氨酸、谷氨酸、脯氨酸的混合样液为例说明，应用纸层析法分离鉴定氨基酸的方法和理论依据。

（2）作出纸层析结果示意图。

9．设计一个实验，分别测定生物材料中还原糖含量及总糖含量，写出主要操作步骤并说明测定原理。

10．某样品中含有4种蛋白质，其等电点和分子量如下：

样品中蛋白质组分 蛋白质A pI 4.82 分子量（KD） 69 45

蛋白质B 蛋白质C 蛋白质D 5.06 5.12 5.12 200 300 90-150

如果用电泳技术分离这4种蛋白质，电泳缓冲液pH应在什么范围？点样处应靠近哪一极？为什么？画出预计的电泳图谱并简要说明其理由。

11．测定一酶液总蛋白含量为60%（W/V），取0.5 mL酶液在标准条件下测定，最初底物浓度为3mol/L，催化反应20分钟后，底物浓度为27mol/L，此时，酶促反应速度达最大速度的70%，已知反应体系的总体积为100ml，问：

（1） 可用何种方法测定酶液中蛋白含量？原理是什么？ （2） 1ml酶液中所含酶的活力单位（IU）是多少？ （3） 该酶的比活力是多少？ （4） 该酶的米氏常数是多少？

12．如何用实验证明DNA半保留复制机制？

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13. 由W，X，Y和Z 4种蛋白组成的混合样品，经凝胶过滤层折后，得到的层折图如图1-1所示。根据图形判断哪个分子的相对分子质量最大？

14. 将A(200 000)，B(150 000)，C(75 000)，D(65 000)4种蛋白质的混合液进行凝胶过滤层折。图1-2中哪个图是真正的层折图，说明理由。凝胶的排阻相对分子质量界限是100 000左右。

15. 某一已纯化的蛋白无SDS的凝胶电泳图如图1-3(a)所示，SDS-PAGE图如图(b)所示，两栖种情况下的电极缓冲液pH值都为8.2。从这两幅图给出的信息，有关该纯化蛋白的结构你能得出什么结论？该蛋白的pI是大于还是小于8.2。

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16. 利用SDS-PAGE测定蛋白质亚基的相对分子质量。下面给出了作为标准的4种纯化蛋白质

的亚基的相对分子量和相应的迁移率。求迁移率为蛋白质1和2的平均值的未知蛋白的相对分子质量。

蛋白质编号 1 2 3 4

17．从肝细胞中提取的一种蛋白水解酶的粗提液300 mL含有150 mg蛋白质，总活力为360单位。经过一系列纯化步骤以后得到的4 mL酶制品含蛋白质0.08 mg，总活力为288单位。整个纯化过程的回收率是多少？纯化了多少倍？

18.由于对蛋白质样品组成不清楚，从以下的SDS-PAGE和阳离子交换层折图1-4分析样品组成。

相对分子质量 15 000 35 000 25 000 20 000 迁移率 5 cm 为1的39％ 为1的63％ 为1的81％

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19. 下表是一种酶的各个纯化步骤的总蛋白和总活性单位数。 纯化步骤 1. 粗提 2. 盐沉淀 3. pH沉淀 4. 离子交换层折 5. 亲和层折 6. 凝胶过滤层折 总蛋白/mg 20 000 5 000 4 000 200 50 45 总活性单位数 4 000 000 3 000 000 1 000 000 800 000 750 000 675 000 (a) 从表中给出的信息计算每一步纯化步骤得到的酶溶液的比活。 (b) 哪一纯化步骤最有效 （相对纯度增加最大）？ (c) 哪一纯化步骤效率最低？

(d) 按照表中的6个步骤纯化的酶是纯酶，表中结果是否有指示？有没有别的方法评价酶的纯度？

20. 试述用凝胶电泳鉴定过氧化物酶同工酶的原理和主要操作步骤？

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