动物细胞培养和核移植技术

溧阳市戴埠高级中学高二生物选修三教学案 班级 姓名 学号 2011.2.17 【课题】专题二 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术 【教学目标】简述动物细胞培养和核移植技术， 动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景 【教学过程】

回忆：植物细胞工程我们学习了哪些技术？最基础的技术是什么？

动物细胞工程我们又将学习哪些技术呢？（阅读书本P44）

你觉得哪项技术是动物细胞工程中最基本的技术呢？你觉得哪些技术与植物细胞工程是雷同？

【动物细胞培养的基本过程】阅读书本 思考：

① （1） 图中步骤①和②分别是什么？目的是什么？

能否直接去培养动物的组织或器官而获得更多的细胞呢？

②

（2）选择原材料时，是选用幼嫩的组织、器官还是成熟或是衰老的组织和器官呢？为什么？

③ ⑦

（3）步骤②能否用胃蛋白酶？为什么？使用蛋白酶

④ 说明细胞间的物质主要成分是什么？如果处理时间

过长会有什么结果？

⑤

（4）步骤④是什么操作？

⑥

（5）细胞在培养瓶中生长具有什么特点？因此要求培养瓶具有哪些特点？细胞能否在培养瓶中一直分裂下去？

（6）⑤是进行什么操作？在此之前的培养一般称为什么培养，在此之后的培养一般称为什么培养？

（7）⑥是进行什么操作？一般传代细胞传至多少代就不易传下去了？有没有可能产生不死细胞，该细胞是产生的原因是什么？为什么使用的或冷冻保存的细胞一般都选择10代以内？

（8）你能否用简要的文字图概括一下动物细胞培养的基本过程。

（9）动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？

1

溧阳市戴埠高级中学高二生物选修三教学案 班级 姓名 学号 2011.2.17 【动物细胞培养的条件】

多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考并讨论以下问题： 1、 体外培养的细胞需要什么样的环境条件？

思考：（1）如何实现培养液的无菌和无毒？

（2）温度和PH一般控制在什么范围内？

（3）为什么要提供氧气和二氧化碳？如何提供？

2、体外培养细胞需要提供哪些物质？

3、比较动物细胞培养和植物组织培养的异同 比较项目 植物细胞培养 动物细胞培养 原理 培养基 结果 培养目的 【动物细胞培养技术的应用】

（1）动物细胞的代谢产物的大规模生产能否通过动物细胞培养来实现？

（2）为什么说动物细胞培养与动物基因工程关系密切？

（3）动物细胞的培养能否用于检测有毒物质？原理是什么？

【动物细胞培养】巩固训练

1．下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是 （ ） A．培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清 B．原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞

C．动物细胞培养一般能够传到40～50代，但其遗传物质发生了改变 D．动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身健康细胞

2．动物细胞培养液和植物组织培养液的共有成分是 （ ） A．葡萄糖 B．蔗糖 C．动物血清 D．维生素

3．动物细胞培养的细胞来自于 （ ） A．任何个体的细胞 B．只能取自动物胚胎细胞 C．只能取自幼龄动物的组织细胞 D．胚胎或幼龄动物的器官和组织细胞

4．下列对动物细胞培养的有关正确的是 ( ) A动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白B 动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散C． 细胞所谓癌变发生于原代培养向传代培养过程中D．培养至50代后传代细胞将全部死亡

2

溧阳市戴埠高级中学高二生物选修三教学案 班级 姓名 学号 2011.2.17 【动物体细胞核移植技术和克隆动物】

讨论：如何用高产奶牛的一个体细胞培育出一头奶牛？

克隆羊多利产生过程：

（1）克隆羊多利培育过程中使用到了哪些动物细胞工程技术？

（2）其中最能体现“克隆”含义的生物技术是什么？该项技术说明了什么？

归纳：

动物核移植技术：

思考：从细胞核的来源看，动物核移

植技术可以分为哪两种？哪一种技术难度更高？为什么？

阅读：

1、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？

2、 用于核移植的供体细胞一般都选用传代10以内的细胞，想一想，这是为什么？

3、你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？

【体细胞核移植技术的应用前景】 思考：（1）你可以大量繁殖优质奶牛了吗？

（2）面临着濒危物种大熊猫，你有什么良策能增加它的数量呢？

（3）转基因动物的优良品质如何保持下去？

（4）器官移植的器官来源有新的渠道了吗？

（5）细胞核移植技术还有哪些应用呢？

（6）细胞核移植技术还存在哪些问题？

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溧阳市戴埠高级中学高二生物选修三教学案 班级 姓名 学号 2011.2.17 总结：核移植技术的应用有哪些？

跟进练习

1．一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能 （ ） A．有选择地繁殖某一性别的家畜 B．繁殖家畜中的优秀个体 C．用于保存物种 D．改变动物的基因型 2．下列哪—项属于克隆 （ ）

A．将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中B．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内 C．将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞 D．将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞群

3．生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易成功“复生”野驴的方法是 （ ） A．将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分化、再分化，培育成新个体 B．将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体

C．取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，经孕育培养成新个体 D．将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体 4．在动物细胞培养中，不会发生的是（ ）

A．酶促反应B．细胞生长C．细胞增殖D．细胞融合

5．为了使用于培养的动物组织细胞分散开，以便配置成一定浓度的细胞悬浮液，选取的组织应该先用哪种物质进行处理（ ）

A．胃蛋白酶B．胰蛋白酶C．盐酸D．胰脂肪酶 6．（多选）美国一个研究小组利用成年猪的动脉血管细胞和模拟胚胎环境的新型生物反应器,成功地在实验室里培育出新的动脉血管.这种血管的外形和功能都与真的血管一样,这一研究成果是生物组织培养领域的重大进展.下列关于以上技术的叙述中,正确的是 （ ） A．属于“克隆” B．可能要利用去核卵细胞

C．关键是激发血管细胞的全能性 D．关键是激发血管细胞发育成血管的潜能 7．（多选）下列对动物核移植技术的描述正确的是

A．哺乳动物核移植包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植，动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎核移植

B．体细胞核移植的过程中可通过显微操作去核法去除卵母细胞中的核 C．体细胞核移植过程中通常采用MⅡ期卵母细胞作为受体细胞

D．通过体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞动物进行了100%的复制

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溧阳市戴埠高级中学高二生物选修三教学案 班级 姓名 学号 2011.2.17 【课题】动物细胞融合与单克隆抗体 一 动物细胞融合

思考：通过长期的实验，科学家们采用体细胞杂交技术获得了“番茄—马铃薯”植株。动物细胞可以吗？自然界中有没有自然状态下的动物细胞融合的例证。

阅读书本图2-23，写出两种动物细胞融合的基本过程。

思考：为什么灭活的病毒可以促进细胞的融合？什么是灭活？为什么要灭活？ 比较：

1、植物体细胞杂交时首先应做什么处理？动物细胞融合时需要吗？为什么？

2、植物原生质体融合的方法有哪些？动物细胞可以使用这些方法吗？还有什么特殊方法？

植物和动物细胞在融合的原理上是否相同？

3、植物体细胞杂交的目的时什么？动物细胞融合的目的也一样吗？

总结：动物细胞融合定义：

二 单克隆抗体 回忆：

1.抗体是由何种细胞产生的？

2.一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？

3.一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？

4.简述获得抗体的传统途径？

5.这种方法获得的抗体有什么缺陷？

某同学的方案：利用动物细胞培养技术，培养大量浆细胞，从而获得大量抗体。试评价该方案的可行性。你有没有更好的方案？

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溧阳市戴埠高级中学高二生物选修三教学案 班级 姓名 学号 2011.2.17 思考：1、为什么要注射抗原？

2、融合后培养液中有几种细胞？ 3、融合后要进行什么操作？目的是什么？杂交瘤细胞具有什么特点？

4、获得杂交瘤细胞后还要进行什么操作？ 操作的目的是什么？

5、如何培养杂交瘤细胞？

6、单克隆抗体具有什么优点？

思考：怎样筛选出杂交瘤细胞？

已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，你能否根据这些信息设计筛选杂交瘤细胞的方案。

三 单克隆抗体的应用 阅读书本回答：

1、 单克隆抗体最广泛的用途是什么？ 作为诊断试剂，它有哪些优点？

2、单克隆抗体还可以用于哪些方面？

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溧阳市戴埠高级中学高二生物选修三教学案 班级 姓名 学号 2011.2.17 【动物细胞融合与单克隆抗体】巩固训练

1.科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是 （ ） A.经过免疫的B淋巴细胞 B.不经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋巴细胞

2.动物细胞融合的目的中最重要的是 （ ） A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞

3.能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 （ ） A.离心 B.灭活的病毒 C.电刺激 D.振动

4．单克隆抗体制备过程中使用的骨髓瘤细胞是一种缺陷型细胞，在含有次黄嘌呤、氨基喋 呤和胸腺嘧啶的培养基（HAT）中无法生长；而小鼠脾细胞是正常细胞，在HAT培养基上可正常存活。用聚乙二醇诱导细胞融合后，经过数代培养，最终可在HAT培养基上存活并能产生单克隆抗体的细胞是 （ ）

A．骨髓瘤细胞之间形成的融合细胞 B．脾细胞之间形成的融合细胞 C．骨髓瘤细胞与脾细胞之间形成的融合细胞 D．脾细胞

5．研究单克隆抗体治疗癌症的思路是 （ ） A．利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞 B．以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞 C．抗癌物质在克隆细胞中大量合成D．单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合 6．用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是 （ ） A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞 B．用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞

C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合

D．筛选杂交积累细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体

7.动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是 （ ） ①诱导融合的方法完全相同 ②所用的技术手段不相同 ③所采用的原理完全相同 ④都能形成杂种细胞

A.①② B.①③ C.②④ D.③④

8.“生物导弹”是指 （ ） A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单抗上连接抗癌药物 9．单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活．增殖的细胞是 （ ） ①B淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞

A．①②③④ B．①③⑤ C．②④ D．①③

10．关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是 （ ） A．可以制成诊断盒．用于疾病的诊断 B．可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗 C．可以利用基因工程技术生产 D．可以在生物体内生产，不能体外生产 11．（多选）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，正确的是 （ ） A．B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般不需要灭活的仙台病毒或聚乙二醇诱导 B．融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克隆抗体

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溧阳市戴埠高级中学高二生物选修三教学案 班级 姓名 学号 2011.2.17 C．体外培养时，一个效应B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖 D．单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，优越性明显 12．（多选）下列细胞中与单克隆抗体的制备有关的是 （ ） A.B细胞 B．T淋巴细胞 C.骨髓瘤细胞 D．杂交瘤细胞 13、破伤风杆菌侵入哺乳动物后能产生破伤风毒素，使动物致

死，为获得抗破伤风毒素的单克隆抗体，可以采用如下办法： 破伤风杆菌——→老鼠 回答下列问题： ↓ ⑴细胞融合所用的细胞A应是 ，要使两种细胞融合，提取细胞A 鼠骨髓瘤细胞 可用 作为诱导剂。 ↓ 细胞融合 ⑵过程中有两次筛选，第一次筛选的细胞B是 细胞，筛选细胞B 第二次筛选的细胞C是 细胞。 ↓

⑶实验前用破伤风杆菌感染老鼠诱导老鼠产生特异性免疫的 细胞培养 。进行感染时需划破老鼠皮肤进行按种，划破的伤口↓

应深一些还是浅一些？为什么？ 筛选细胞C （4）制备单克隆抗体的原理是 。 ↓ （5）单克隆抗体是由 细胞产生的。 继续培养 （6）制备单克隆抗体用到的动物细胞工程技术手段↓ 有 。 从培养液中提取抗体 （7）静脉注入而不是口服单克隆抗体的原因是 。

（8）单克隆抗体与传统方法获得的抗体相比具有的特点是 （9）试设想运用生物工程其它领域的技术制备单克隆抗体的一条途径_ .

14、下图是制备分泌抗X抗体的过程，据图回答： （1）给小鼠注射抗原的目的是____________。 （2）在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有______ ____的特性。 （6）图中有两次筛选过程，其中步骤④的目的是筛选出_______________________，步骤⑤⑥的目的是筛选出__________________。

（7）请根据以下信息，设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中筛选出杂交瘤细胞。已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。 方法：__________ ________________。 原理：______________________ _。

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24(1)获得能产生相应抗体的B淋巴细胞(2)既能无限增殖，又能产生特定抗体(3)动物细胞融合 动物细胞培养 灭活病毒 (4)动物血清(5)胰蛋白酶 (6)杂交瘤细胞 能产生特定抗体的杂交瘤细胞(7)方法：培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞 原理：加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖

二、相关知识连接

1 胰蛋白酶 2 影响酶活性的因素 3 培养基和培养液 4 植物体细胞杂交

6、动物核移植是指将动物的一个细胞的 ，移入一个已经 的卵母细胞中，使其 并发育成一个 ，这个胚胎最终发育成动物个体。可分为 和 。

7、克隆的条件：⑴具有包含物种 的活细胞；⑵能有效调控细胞核发育的 ；⑶完成 的必要的环境条件。

8、动物体细胞核移植可用于加速家畜 进程，促进 繁育；保护 ； 生产 ；作为异种移植的 ；用于组织器官的 。 9、克隆动物存在 、 、 等问题。 四、知识探究

植物细胞培养和动物细胞培养的比较 比较项目 植物细胞培养 动物细胞培养 五、思维拓展 六、巩固性练习

原理 培养基 结果 培养目的

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专题2 细胞工程 2.2 动物细胞工程 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术 1、动物细胞工程有哪些常用的技术手段？

动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等 2、什么是动物细胞培养？

就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞后，放在适宜的培养基中，使其生长和增值。

3、动物细胞培养包括哪些基本过程？

⑴、动物组织 + 胰蛋白酶或胶原蛋白酶，得到分散的单个动物细胞。 ⑵、培养液稀释动物细胞，制成细胞悬浮液，培养瓶培养增值。

⑶、出现接触抑制时，再用胰蛋白酶处理成单个细胞的悬浮液，继续培养增值。 4、什么是细胞贴壁？

⑴、概念：指培养过程中，细胞贴附在瓶壁上的现象。

⑵、培养贴附性细胞的要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒。 5、什么是接触抑制？

指贴壁细胞因为表面相互接触时导致细胞停止分裂增值的现象。 6、什么是原代培养？

指动物组织经过胰蛋白酶处理后的初次培养。一般能传代约10代，得到细胞株。 7、什么是传代培养？

指贴壁生长的细胞（10代后）经胰蛋白酶处理后的继续培养，得到细胞系，能无限传代。 细胞系的细胞已经发生突变，基本上具有癌细胞的特性。 8、动物细胞培养需要哪些条件？

⑴、无菌无毒的环境：培养液应事先进行灭菌处理。

⑵、营养（合成培养基的成分）：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、血浆、血清等。

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⑶、温度：适宜温度未36.5C±0.5C ⑷、PH：7.2~7.4

⑸、气体环境：空气95%，CO25% 9、动物细胞培养技术有哪些应用？

⑴、生产病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 ⑵、用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。 10、什么是动物体细胞核移植技术？

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溧阳市戴埠高级中学高二生物选修三教学案 班级 姓名 学号 2011.2.17 ⑴、概念：就是将动物的一个体细胞的细胞核，移植到一个去核卵细胞中，使其重组并发育成一个

新的胚胎，并使这个胚胎最终发育成为动物个体。 ⑵、原理：细胞核全能性 ⑶、过程：

①、供体体细胞经细胞培养后，提取细胞核；

②、提取卵巢卵母细胞，在其减数分裂第二次分裂中期除去细胞核，制成无核细胞质；

③、将供体核与无核卵母细胞质融合，并培养成早期胚胎； ④、将早期胚胎移植到代孕母体子宫内，发育成新个体。 11、怎样获得克隆动物？

⑴、原理：细胞核全能性

⑵、技术支持：动物体细胞核移植技术 ⑶、应用：

①、加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育。 ②、保护濒危物种 ③、生产医用蛋白

④、作为异种移植的细胞、组织或器官供体。 ⑤、用于组织器官的移植

⑷、尚存问题：克隆动物存在遗传和生理缺陷。

如体重较大、异常肥胖、发育困难、脏器缺陷、免疫失调等 12、什么是克隆动物？

指利用核移植方法的无性繁殖技术得到的动物。 1、动物细胞培养的过程 细胞株 细胞系 动物胚胎或幼龄动胰蛋白酶、剪碎 单个细胞 动物血清、葡萄糖、氨细胞悬浮50代细胞 ?? 基酸、无机盐、维生素 物器官、组织 原代培养 传代培养

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溧阳市戴埠高级中学高二生物选修三教学案 班级 姓名 学号 2011.2.17 2、动物细胞培养与植物组织培养的区别。

动物细胞培养与植物组织培养有许多相似之处，也有许多不同点。一是它们用的培养基不同，植物组织培养用的一般是固体培养基，而动物细胞培养用的一般是液体培养基。第二是它们的培养基的成分不同。动物细胞培养的培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐和维生素，另外还有动物血清。植物组织培养所需要的培养基包含植物生长和发育的全部营养成分，如矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素和有机添加物，没有动物血清。第三是植物组织培养最后一般得到新的植物个体，而动物细胞培养因为动物体细胞一般不能表达其全能性，因此得到的是同一种的细胞。

解析：⑴实验目的是为了获取抗破伤风毒素的抗体，产生抗体的是经免疫的淋巴B细胞。为使细胞相互融合，必须有一定的诱导剂辅助，常用的有灭活的仙台病毒、聚乙二醇等。

⑵经诱导后的细胞不一定融合，且融合的细胞也有多种，可能是A与A融合，A与瘤细胞融合或瘤细胞与瘤细胞融合。所以要用一定的方法筛选，选出目的细胞——A与瘤细胞融合的杂种种瘤细胞，得到的杂种瘤细胞不一定能产生抗体。能产生抗体的也不定是抗破伤风毒素的抗体，所以要再一次筛选，选出产生抗破伤风毒素抗体的细胞。

⑶抗体的产生属于特异性免疫的体液免疫。另外，破伤风杆菌是厌氧生物，为使感染成功，需接种得深一些。

答案：⑴效应淋巴B细胞、灭活的仙台病毒或聚乙二醇 ⑵杂种瘤细胞、能产生所需抗体的杂种瘤细胞

⑶体液免疫、应深一些，因为破伤风杆菌是厌氧生物

5.动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答

(1)容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自 。 (2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是 ，然后用 酶处理，这是为了使细胞分散开来。这样做的目的是 。

(3)培养首先在B瓶中进行。瓶中的培养基成分有 等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到 代，到此时的培养称为 。

(4)为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用 处理，然后配置成 ，再分装。

(5)在C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡。原因是__________。

6.某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：

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溧阳市戴埠高级中学高二生物选修三教学案 班级 姓名 学号 2011.2.17 （1）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其它培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量_________。

（2）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是___________。细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是___________________。

（3）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长____________。药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更_______。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用___________消化处理。

（4）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的_____________。

（5）已知癌细胞X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为A．B两组，A组细胞培养液中加入___________，B组细胞培养液中加入无菌生理盐水，经培养后，从A．B两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在A．B两组细胞中的________或_______合成水平的差异，确定Y的药效。

7.用动物细胞培养获得的细胞可用来检测有毒物质。请根据条件设计实验检测不同浓度的农药甲胺磷对兔子细胞形态变异的影响。

⑴所给材料：已培养好的兔子细胞悬浮液，浓度分别为50PPM、100PPM、200PPM、400PPM的甲胺磷溶液、兔子细胞的液体培养基、显微镜一台、载玻片、盖玻片、细胞培养瓶各若干。 ⑵实验步骤：

① ② ③ ④

⑶设计一个表格，用于实验结果统计。

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溧阳市戴埠高级中学高二生物选修三教学案 班级 姓名 学号 2011.2.17 CDDB （1）（2）略

3.(1)幼龄动物的器官或组织或动物胚胎(1分) (2)剪碎(1分) 胰蛋白(1分) 使每个细胞能与培养液接触(1分) (3)动物血清(1分) 10(1分) 原代培养(1分) (4)胰蛋白酶(1分) 细胞悬浮液(1分) (5)细胞没有发生癌变(1分) 4、（1）多 （2）血清可以补充合成培养基中缺乏的物质 维持培养液pH （3）停止 多 胰蛋白酶 （4）抗生素 （5）Y mRNA 蛋白质 5、参考答案：⑵实验步骤：（1）将兔子细胞悬浮液均匀分为5份，分装五个培养瓶中，各加等量培养基标上1、2、3、4、5。（2）然后在1号瓶不加甲胺磷、2-5号瓶分别加等量的50~400PPM的甲胺磷液。（3）在一定条件下培养，（4）一定时间后取各瓶中悬浮液各二滴(等量)在两块载片上加盖玻片(载玻片上标相应的1、2、3、4、5)观察。 ⑶

瓶号 1 2 3 4 5 细胞总数 变异细胞数 变异比例

8、1952~1953年，美国科学家斯提瓦用胡萝卜根的悬浮培养细胞进行人工培养，发现单个细胞能像受精卵发育成胚一样的途径，发育成完整植株。1997年英国维尔穆特等人从白面母绵羊体内取出乳腺上皮细胞静息培养，然后把它的核移入黑面母绵羊去核的卵细胞中形成重组细胞，并将重组细胞培养成胚胎，将胚胎植入另一母羊的子宫内后获得了克隆羊多利。 （1）文中的悬浮培养细胞和乳腺上皮细胞均为_______ _____。

（2）斯提瓦的实验证明了________________。维尔穆特的实验证明了____ ____ _____。从细胞结构和遗传角度分析，两位科学家实验结论的得出，根本原因在于_____ _ ______。

（3）斯提瓦和维尔穆特实验的差别在于______ _ _____。 （4）维尔穆特的实验技术又称为_____ _____技术。该技术的经济意义在于： ①_____ __ ______；②____ ________。

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