答案--生物制品复习题(2)

9、简述鸡胚成纤维细胞制备的主要操作步骤。 a.细胞培养用品的清洗与消毒；

b.取胚及剪碎：取出胚胎，用灭菌剪刀剪去头部、翅爪及内脏后，尽量剪碎余下组织，用Hank’s液洗至不浑浊为止；

c.消化：加预热的0.06%胰酶于组织块中，37c水浴静止消化10~15min；

d.洗涤、吹打：用Hank’s液将组织块轻轻地冲洗两次后，加入含10%~20%犊牛血清的MEM培养液（血清能终止残存胰酶的作用），反复吹打小块，尽量使细胞分散；

e.转瓶：将组织块转入细胞培养瓶，置37c培养箱（烛缸）培养，；

f.换液：生长成单层细胞后，即可倒去细胞瓶中的液体，加入37c预热的Hank’s液洗两次，再加入含10%~20%犊牛血清的MEM培养液继续培养。

g.接种病毒：24h后，生长好的细胞即可接种病毒。倒掉培养液，加入预热的Hank’s液洗两次，加病毒液1ml，室温或37c孵育（吸附）15min~30min后，不需吸弃病毒液，再加入含10%~20%犊牛血清的MEM，继续37c烛缸培养。

10、动物病毒培养有哪些基本技术？

1.静置培养、2.转动培养、3.悬浮培养、4.微载体培养 11、生物制品企业应具备哪些废弃物处理设施？ 污水处理：臭氧法

利用臭氧中氧的强氧化作用，使污水中的致病菌、病毒以及细菌芽孢迅速杀灭 带毒粪便、残渣与垫草的处理：生物发酵

利用废物中的微生物，使他们进行发酵，分解有毒物质成为无毒物质，发酵完毕，清出其腐烂物 动物尸体与脏器处理：焚尸炉

应用喷柴油的方法，在引风条件下进行焚烧 附：仪器设备名称：

灭菌与净化设备：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌器、电离辐射灭菌、无菌室、净化工作台

微生物培养装置：温室、细胞培养转瓶机、发酵培养罐、生物反应器、微生物浓缩装置----超滤膜、孵化器

乳化器：胶体磨、高压匀浆泵 冻干机

分装与包装设备：理瓶旋转工作台、多头自动分装机、胶塞定位机、自动灌装半加塞联动机 冷藏设备：冷库、冷藏运输设备、液氮罐 12、叙述大肠杆菌灭活蜂胶疫苗的制备流程要点。

a.细菌培养基的配制：麦康凯琼脂用于分离大肠杆菌，肉汤培养基用于培养大肠杆菌以及无菌检。 b.蜂胶佐剂配制：用95%酒精研磨、溶解并稀释蜂胶至30mg/ml。

c.致病性大肠杆菌的分离培养：将菌种划板于麦康凯培养基，37c培养24h，挑单克隆少许于少量肉汤中复壮6~8h，再转入大量肉汤中增殖培养。

d.制苗大肠杆菌灭活、计数与鉴定：留样1ml，其余加0.3%甲醛灭活，培养24h后经肉汤无菌检（37c摇床培养24h），若为阴性，则可作为灭活菌苗的抗原。取100ul留样菌液作倍比稀释，铺板于麦康凯培养基，培养24h后数菌落，算出菌液浓度。将留样菌液分别接种至各种生化培养基中，作生化鉴定。

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e.蜂胶灭活疫苗配制及质量检验：将蜂胶加到灭活菌液中，使蜂胶终浓度为10mg/ml，混匀使用。取0.5ml肌肉注射于雏鸡，作安全检。

13、详述基因工程干扰素的制备流程。

将干扰素基因导入大肠杆菌内，通过培养大肠杆菌来生产。 14、设计用兔制备禽流感H9亚型高免血清的基本流程。 15、概述禽流感H9亚型灭活油乳剂疫苗的制备流程。 16、设计用兔制备大肠杆菌高免血清的基本流程。 17、详述粗制猪白细胞干扰素的制备方法。 19、生物制品有什么作用？有哪些种类？

（1）作用：生物制品可用于人类疾病的预防、治疗和诊断。

（2）a.疫苗、b.抗血清和抗毒素、c.诊断制品、d.血液生物制品、e.微生态制剂、f.细胞因子及重组DNA产品、g.其他制品。

20、简述生物制品的命名原则。

21、概述我国近代动物生物制品主要成就。

22、结合我国动物生物制品现状，试述我国动物生物制品学的发展趋势。

23、请分别举例子说明预防、诊断、治疗生物制品

a.预防类：乙肝疫苗、破伤风联合疫苗等；b.治疗类：免疫血清、凝血因子等；c.诊断制品： HIV抗原、常用的抗体等。

24、动物生物制品的现状

多联疫苗的使用；试剂盒的诊断作用；抗血清的治疗应用；工程菌的研究等。 25、动物生物制品研究存在的难题

生物制品的研制赶不上病毒的变异快；毒力基因的转移导致新的病原微生物的出现；肿瘤不出现，难以观察，难以治疗等。

26、举例新型佐剂、新型灭活剂、新型保护剂的应用及其特点。

a.佐剂（卡介苗），特点：具有很强的免疫调节效应，可通过刺激机体产生干扰素而增强疫苗的免疫效果；b.灭活剂（β-丙内酯），特点：直接作用于病原体DNA或RNA，改变其核酸结构达到灭活目的，而不直接作用于蛋白。极易水解，无残留，并且水解产物无毒无害；c.保护剂（脱脂牛奶），特点：可促使因冻干而受损的细胞修复。

27、生物制品生产原料主要来源是什么？

来源于生物材料（包括器官、组织、细胞、微生物、工程菌构建与表达）的增殖或培养。 28、一般生物制品生产的主要流程

a.材料的选择与增殖；b.目的产物的分离纯化；c.生物制品的商品化生产，半成品配制；d.分装，成品质量鉴定；e.生物制品的包装、保存与运输。

29、生物制品生产中的分离与纯化手段

过滤、离心、层析、透析、盐析、电泳、沉淀法、水解法、蒸馏法等。 30、体外培养细胞的三种类型，以及主要污染原

（1）a.原代细胞（2~3代）、b.二倍体细胞株（有限性，10~50代）、c.传代细胞（恶性转化细胞系、转化细胞系）。

（2）主要污染源：细菌污染、真菌污染、支原体污染、病毒污染、来源血清的原虫污染。 31、鸡胚增殖病毒的接种方式有哪些

a.绒毛尿囊膜接种法；b.尿囊腔接种法；c.羊膜腔接种法；d.卵黄囊接种法；e.脑内接种法；f.胚体接种法；g.静脉接种法

32、动物干扰素的制备流程

(1)无菌采集禽的新鲜抗凝血、分离收集白细胞悬液；

(2)禽白细胞悬液中加入启动用粗纯制禽白细胞干扰素进行短时启动超诱导培养；

(3)加入诱导剂——鸡新城疫病毒(NDV)及含有禽血清或血浆的营养液进行诱生培养18-24小时； (4)收集上清液，灭活鸡新城疫病毒等，过滤除菌；

(5)分装好的禽白细胞干扰素粗制品，冷冻保存。经检定合格后即可使用。 33、禽流感H5N1特异性转移因子的制备方法

（1）免疫：用禽流感病毒H5N1血清亚型灭活疫苗肌肉注射免疫10日龄实验鸡，在15日龄再以同批疫苗0.3mL肌肉注射做为加强免疫。

（2）抗体效价检测：每隔一定时间翅静脉采血，分离血清，进行HA和HI试验，检测疫苗免疫抗体效价。

（3）禽流感病毒H5N1血清亚型特异性TF的制备：密切监测疫苗免疫抗体水平，在抗体水平达到高峰值时，翅静脉无菌采取抗凝血，分离获得白细胞。加入细胞培养液、小牛血清、双抗，烛缸培养白细胞。培养结束收集细胞液，超声波破碎细胞，再经过透析获得禽流感病毒H5N1血清亚型特异性转移因子。过滤除菌后，分装，置－20℃保存。

34、白细胞介素2的制备流程

先提取RNA，再以RT-PCR扩增白细胞介素-2基因，与原核表达载体pBAD构建表达质粒pBAD/IL-2，转化大肠杆菌LMG194后诱导表达。大肠杆菌诱导后经超声波裂解、离心去沉淀即为IL-2蛋白粗制品。用Ni-NTAArgarose蛋白纯化系统可以较快的得到IL-2纯品。粗制品或纯品加入甘氨酸等稳定剂和助溶剂，无菌过滤、分装和冻干后制成成品，-20℃保存。 35、猪发生猪流感时能用鸡干扰素治疗吗？

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