食品科学与技术 2010生化实验讲义(4)

⒋底物专一性

⑴取三支试管，分别编号1、2和3 ⑵向三支试管中分别加入15滴酶抽提液

⑶向管1中加入15滴0.01mol/L的邻苯二酚溶液，向管2中加入15滴0.01mol/L的间苯二酚溶液，向管3中加入15滴0.01mol/L的对苯二酚溶液。 ⑷混合各试管中的溶液，把三支试管都放于37℃水浴中。

⑸以5min的时间间隔，观察溶液的颜色变化，共保温15min，使用符号“＋”“＋＋”??表示每管中溶液的颜色深浅，即表示酶的活性。 ⑹多酚氧化酶的最适底物是哪一个？

表13 多酚氧化酶最适底物的判断

底物 邻苯二酚 间苯二酚 对苯二酚 酶活性 5min 10min 15min ⒌底物浓度

⑴取三支试管，分别编号为1、2和3

⑵向管1中加入0.1mL0.01mol/L的邻苯二酚溶液和3.9mL的水，混合

⑶向管2中加入1.0mL0.01mol/L的邻苯二酚溶液和3mL水，混合 ⑷向管3中加入4mL0.01mol/L的邻苯二酚 ⑸向三支试管中分别加入0.5mL酶抽提液，混合

⑹把三支试管放于37℃水浴中保温1min，记录观察到的结果 ⒍酶浓度的影响

⑴取2支试管，分别编号为1和2

⑵向管1中加入15滴0.01mol/L的邻苯二酚和15滴酶抽提液，混合 ⑶向管2中加入15滴0.01mol/L的邻苯二酚和1滴酶抽提液，14滴水，混合 ⑷把两支试管放于37℃水浴中保温2min，观察每管中溶液颜色的变化。 ⒎氢离子浓度

⑴取5支试管，分别编号1、2、3、4和5

⑵向管1中加入2mL0.96％的盐酸，向管2中加入2mL0.1％的乳酸；向管3中加入2mL蒸馏水，向管4中加入2mL0.01％的碳酸钠溶液，向管5中加入2mL0.5％的碳酸钠溶液。每管的pH应分别为1、3、5、7和9。

⑶向5支试管中分别加入15滴0.01mol/L的邻苯二酚溶液和15滴酶液。

⑷混合各管内容物，把各管放入37℃水浴中保温5min，观察每管中溶液的颜色变化并确定多酚氧化酶作用的最适pH。

六、思考题

⒈向多酚氧化酶溶液中加入苯硫脲，再加入其底物，为什么溶液的颜色不变化？ ⒉为什么土豆及苹果等去皮后表面变成褐色？ ⒊为从组织细胞中获得酶的粗提纯样品常用哪些方法？ ⒋欲获得有活性的酶应注意哪些因素？ ⒌为什么用氟化钠作为抽提溶剂？

⒍多酚氧化酶的最适温度、最适pH是多少？

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