蛋白质化学
一、选择题(从给出的几个答案中选择一个正确答案)
1、为获得不变性的蛋白质,常用的方法有
A、用三氯醋酸沉淀 B、用苦味酸沉淀 C、用重金属盐沉淀 D、低温盐析 2、人体非必需氨基酸包括
A、蛋氨酸 B、酪氨酸 C、亮氨酸 D、苯丙氨酸 E、异亮氨酸 3、对于蛋白质的溶解度,下列叙述中哪一条是错误的?
A、可因加入中性盐而增高 B、在等电点时最大C、可因加入中性盐降低 D、可因向水溶液中加入酒精而降低 E、可因向水溶液中加入丙酮降低 4、芳香族必需氨基酸包括
A、蛋氨酸 B、酪氨酸 C、亮氨酸 D、苯丙氨酸 E、脯氨酸 5、含硫的必需氨基酸是
A、半胱氨酸 B、蛋氨酸 C、苏氨酸 D、亮氨酸 E、色氨酸 6、蛋白质变性时不应出现的变化是:
A、蛋白质的溶解度降低 B、失去原有的生理功能 C、蛋白的天然构象破坏 D、蛋白质分子中各种次级键被破坏 E、蛋白质分子个别肽键被破坏 7、一蛋白质分子中一个氨基酸发生了改变,这个蛋白 A、二级结构一定改变 B、二级结构一定不变
C、三级结构一定改变 D、功能一定改变 E、功能不一定改变 8、在电场中,蛋白质泳动速度取决于
A、蛋白质颗粒的大小 B、带净电荷的多少 C、蛋白质颗粒的形状 D、(A)+(B) E、(A)+(B)+(C) 9、某蛋白质的等电点为7.5,在PH6.0的条件下进行电泳,它的泳动方向是:
A、原点不动 B、向正极移动 C、向负极移动 D、向下移动 E、无法预测 10、典型的α-螺旋中每圈含氨基酸残基数为:
A、4.6个 B、3.6个 C、2.6个 D、5.6个 E、10个 11、茚三酮与脯氨酸反应时,在滤纸层析谱上呈现( )色斑点 A、蓝紫 B、红 C、黄 D、绿 12、用凝胶过滤柱层析分离蛋白质时,一般讲都是
A、分子体积最大的蛋白质首先洗脱 B、分子体积最小的蛋白首先洗脱 C、没有吸附的蛋白质首先洗脱 D、不带电荷地先洗脱 13、蛋白质的别构效应
A、总是和蛋白质的四级结构紧密联系的 B、和蛋白质的四级结构关系不大
C、有时与蛋白质的四级结构有关,有时无关 D、有时和蛋白质的二级机构也有关 14、定性鉴定20种氨基酸的双向纸层析是
A交换层析 B亲合层析 C分配层析 D薄层层析 15、双缩脲反应主要用来测定
A、DNA B、RNA C、胍基 D、肽 16、胰蛋白酶专一水解多肽键中
A、碱性残基N端 B、酸性残基N端 C、碱性残基C端 D、酸性残基C端 17、通常( )使用测定多肽链的氨基末端
A、CNBr B、丹磺酰氯 C、6mol/HCl D、胰蛋白酶 18、下列哪一种是目前研究蛋白质分子空间结构最常用的方法
A、X光衍射法 B、圆二色性 C、荧光光谱 D、电泳法 19、根据下列数据,经某一凝胶过滤柱后, 最先被流洗出的样品是
A、肌红蛋白(分子量16.900) B、血清清蛋白(分子量68.500) C、过氧化氢酶(分子量221.600). D、血红蛋白(分子量64200)
20、典型的球蛋白在pH7水溶液中,其分子中下列哪些残基常处在分子内部?
A、Asp B、His C、Val D、Glu 21、血红蛋白的氧合曲线呈S形是由于
A、氧与血红蛋白各亚基的结合是互不相关的独立过程 B、第一个亚基与氧结合后增加其余亚基与氧的亲合力 C、第一个亚基与氧结合后降低其余亚基与氧的亲合力 D、氧使亚铁变为正铁
22、关于蛋白质结构的叙述正确的是
A、链内二硫键不是蛋白质分子构象的决定因素
B、带正电荷的氨基酸侧链伸向蛋白质分子的表面,暴露在溶剂中 C、蛋白质的一级结构是决定高级结构的重要因素 D、只有极少数氨基酸的疏水侧链埋藏在分子内部 23、测定蛋白质分子量的方法
A、聚丙稀酰胺凝胶电泳 B、SDS聚丙稀酰胺凝胶电泳 C、紫外分光光度法 D、纸层析
24、利用蛋白质颗粒带电荷性质进行的操作技术有
A、电泳 B、超速离心与超滤 C、凝胶过滤 D、紫外吸收 25、维系球蛋白三级结构稳定的最重要的键或作用力是
A、肽健 B、盐键 C、氢键 D、范德华力 E、疏水键 26、下列关于蛋白质的α-螺旋的叙述,哪一项是正确的? A、属于蛋白质的三级结构
B、多为右手α-螺旋,3.6个氨基酸残基升高一圈
C、二硫键起稳定作用 D、盐键起稳定作用 E、以上都不对 27、下列那种分离蛋白质技术与蛋白质的等电点无关? A、亲和层析 B、等电点沉淀 C、离子交换层析 D、凝胶电泳法 E、等电聚焦法 28、蛋白质变性是由于
A、蛋白质一级结构的改变 B、蛋白质亚基的解聚 C、蛋白质空间构象的破坏 D、辅基的脱落 29、不直接参入维系蛋白质三级结构的化学键是
A、氢键 B、盐键 C、疏水键 D、二硫键 E、肽键 30、在中性溶液中下列那些氨基酸带正电荷
A、谷氨酸 B、谷氨酰胺 C、丝氨酸 D、赖氨酸 E、酪氨酸
二、填空题
1、胰蛋白酶专一性地切断_________和_________的羧基端肽键。
2、蛋白质分子中的α-螺旋结构靠氢键维持,每转一圈上升_________个氨基酸残基。 3、一般说来,球状蛋白______性氨基酸残基在其分子内核,_________氨基酸残基在分子外表。 4、丝—酪—丝—甲硫—谷—组—苯丙—精—色—甘用胰蛋白酶彻底水解后可得____个肽段。 5、最早提出蛋白质变性理论的科学家是_________。
6、精氨酸的pKl(C00H)值为2.17,pK2(NH3+)值为9.04,pK3(胍基)值为12.98,其pI(等电点
时的pH值)为_________。天冬氨酸的pK1(COOH)值为1.88,pK2(COOH)H)值为3.65,pK3(NH3=)值为9.60,其pI值为_________。
7、在某一特定pH之下,蛋白质带等量的正电荷与负电荷,该pH值是该蛋白的_____。 8、蛋白质中主要两种二级结构的构象单元是_________和________。
9、用分光光度计在280nm测定蛋白质有强烈吸收,主要是由于_________,_________和
_________等氨基酸侧链基团起作用。
10、维持蛋白质构象的次级键主要有_________、_________和________。
11、已知某种氨基酸的pK1和pK2分别是2.34和9.69,它的pI是_________。
12、肽链的N末端可以用_________法、_________法、 _________法和________法测定,而_________法和_________法则是测定C末端氨基酸最常用的方法。
13、分离蛋白质混合物的各种方法主要根据蛋白质在溶液中的下列性质_______,________,_______,_______。
14、蛋白质是两性电介质,当溶液的pH在其等电点以上时蛋白质分子带_________电荷,
而pH在等电点以下时,带_________电荷。
15、已知蛋白质存在的超二级结构有三种基本组合形式_______、_______、_______。 16、当蛋白质和配基结合后,改变了该蛋白质的构象,从而改变该蛋白质的生物活性的现象
称为_________。
17、蛋白质主链构象的结构单元_____,_____,_____,_____。 18、蛋白质变性时_______结构不变。
19、用凯氏定氮法, 测定正常人血清含氮量为11.584mg/ml, 则此人血清蛋白含量为
mg/100ml_________。
20、可以按蛋白质的分子量,电荷及构象分离蛋白质的方法是_________。
三、名词解释:
1、 肽键;2、蛋白质的亚基;3、等电点(PI);4、蛋白质的四级结构;5、蛋白质的
变性;6、蛋白质的沉淀;7、肽;8、活性肽;9、必需氨基酸;10、结合蛋白;11、Edman反应;12、两面角;13、超二级结构。
四、复习思考题:
1.组成蛋白质的元素有哪几种?哪一种为蛋白质分子中的特征性成分?测其含量有何用途?
2.何为蛋白质的两性解离?这种性质对于蛋白质的分离纯化有何意义? 3.沉淀蛋白质的方法有哪些?各有何特点?
4.组成蛋白质的氨基酸只有20种,为什么蛋白质的种类却极其繁多?61个氨基酸残基能形成多少不同的多肽(以上氨基酸属于20种天然氨基酸)? 5.蛋白质的一级结构与功能的关系,空间结构与功能的关系? 6.蛋白质的一级、二、三、四级结构及维持各级结构的力是什么?
7.什么是蛋白质的变性作用?举例说明实际工作中应用和避免蛋白质变性的例子。 8.蛋白质能协助生物体维持它的PH,为什么它具有这种功能?
9.某一多肽:①经完全水解得Gly,Ala,VaL2,Leu2,Ile,Cys4。Asp2,Gln2,Tyr2;②FDNB处理后用酸水解得到DNP-Gly,③C-未端分析得Asp,④部分水解得到下列的小肽:
⑴、Cys、Cys、Ala; ⑵、Glu、AsP、Tyr; ⑶、Gllu、Glu、Cys; ⑷、Glu、len、Glu; ⑸、Cys、Asp; ⑹、Tur、Cys;
⑺、Ser、Val、Cys; ⑻、Gllu、Cys、Cys; ⑼、Ser、leu、Tyr; ⑽、Leu、Tyr、Glu;
⑾、Gly、Ile、Val、Glu、Glu;
⑤这个多肽用写蛋白酶水落石出解后产生的产物中,有一个肽再经水解得到Ser、Val、(12)和Ser、Len(13);请写出这条多肽的氨基酸排列顺序。 10.从氨基本的PK值计算Gly(PK=2.34 PK2=9.60)、Ser(PK1=2.21 PK2=9.15)、
Gln(PK1=2.9 PK2=4.25 PK3=9.67)、Lys(PK1=2.18 PK2=8.95 PK3=12.48) 的PI。
11.有一个氨基酸的混合物,它含有Lys、Arg、Asp、Gln、Tyr和Ala,在PH时加到一个 阴离子交换树脂是,如果用逐步降低洗脱液PH的方法来进行洗脱,请指出氨基酸洗脱
下来的顺序(ArgPI=10.76、LysPI=9.74、ThrPI=6.18、AlaPI=6.0、GluPI=3.22、AspPI=2.77)。 12.E有浓度为1.0mol/L-1的Gly溶液1000ml,在职它等电点时加入0.5mol的HCl,问此
溶液的PH是多少?(GlyPKa=2.34)
核酸化学 一、选择题
1、绝大多数真核生物mRNA5'端有:
A、帽子结构 B、polyA C、起始密码子 D、启动子 E、SD序列 2、Sanger的双脱氧末端终止法DNA序列测定中不需要下列哪种物质
A、ddNTP B、dNTP C、[α-32P]dATP D、[α-32P]ddATP E、DNA聚合酶 3、DNA的变性是指:
A、DNA降解 B、3’,5’-磷酸二酯键断裂
C、DNA双股链解离 D、DNA超螺旋化 E、DNA一级结构的破坏 4、核酶(ribozyme)的底物是
A、DNA B、RNA C、核糖体 D、细胞核膜 E、核蛋白 5、RNA A、为线性双链分子 B、为环状单链分子
C、电泳时移向正极 D、可与互补的DNA杂交 E、通常在序列中A与U浓度相等
6、脱氧核糖核酸(DNA)分子中碱基配对主要依赖于
A、二硫键 B、氢键 C、共价键 D、盐键 7、证明DNA是遗传信息携带者的科学家是
A、Meselson和Stahl B、Watson和Crick C、Avery、MacLeod和McCarty D、Berg和Cohen 8、将RNA转移到硝基纤维素膜上的技术叫
A、Southem印迹法 B、Northern印迹法 C、Western印迹法 D、Eastem印迹法 9、在适宜条件下,核酸分子两条链通过杂交作用可自行形成双螺旋,取决于
A、DNA的融点 B、序列的重复程度C、核酸链的长短 D、碱基序列的互补 10、RNA经NaOH水解,其产物是
A、5’—核苷酸 B、2’—核苷酸
C、3’—核苷酸 D、2’和3’—核苷酸混合物 11、热变性的DNA分子在适当条件可以复性,条件之一是
A、骤然冷却 B、缓慢冷却 C、浓缩 D、加入浓的无机盐 12、用寡聚脱氧胸苷酸(oligodT)纤维素柱层析分离mRNA是属于
A、分配层析 B、交换层析 C、亲和层析 D、薄板层析 13、下列双链多核苷酸中,那些Tm最低
A、CATGTAGCTATT B、CCCGATGTACCA
GTACATCGATAA GGGCTACATGGT C、CGTAATCCGTAAG D、GATACGATGTTAT GCATTAGGCATTC CAATGCTACAATA 14、5’GGCAACGG3’的互补链碱基顺序应该是
A、3’GGCTTGCC5’ B、3’CCGTTGCC5’
C、3’CCGGTGCC5’ D、3’GCGTTGCG5’ E、3’CCGAAGCC5’ 15、大多数真核生物mRNA 5’端含
A、二氢尿嘧啶 B、3—甲基尿嘧啶 C、6—甲基腺嘌呤 D、7—甲基鸟嘌呤 0 E、不含上述组分
18、下列物质中只存在于DNA而不存在于RNA分子中的是
A、Uracil B、ThymineC C、ytosine D、Adenine E、Deoxyribose 19、DNA上的内含子(intron)是
A、不被转录的序列 B、被转录但不被转译的序列 C、被转录也被转译的序列 D、编码序列 20、在蛋白质生物合成中转运氨基酸的RNA是
A、tRNA B、mRNA C、rRNA D、HnRNA E、7sRNA 21、用苔黑酚法可以鉴定
A、RNA B、DNA C、所有核酸 D、蛋白质 ’E还原糖 22、hnRNA是下列那种RNA的前体
A、tRNA B、真核rRNA C、真核mRNA D、原核rRNA E、原核mRNA 23、在一个DNA分子中,若A所占摩尔比为32.8%,则G的摩尔比为 A、67.2% B、32.8% C、17.2 D、65.6% E、16.4% 24、下列核酸变性后的描述,那一项是错误的
A、共价键断裂,分子量变小 B、紫外吸吸值增加
C、碱基对之间的氢键被破坏 D、粘度下降 E、比旋值减少 25、下列对tRNA一级结构的叙述,那一项是正确的 A、几千个、甚至几千万个核苷酸组成的多核苷酸链 B、单核苷酸之间是通过磷酸一酯键相连的
C、RNA分子中A不一定等于U,而G不一定等于C
D、RNA分子中含有稀有碱基 E、mRNA的一级结构决定了DNA的核苷酸序列
二、填空题
1、真核生物mRNA转录后的成熟步骤主要包括_________、_________、________、_________。
2、一般来说,DNA分子中G—C含量高,分子比较稳定,融解温度(Tm)________。
,
3、真核生物mRNA的5-帽子结构通式是________。
4、DNA变性后,紫外光吸收能力________,沉降速度________,粘度________。 5、B型DNA双螺旋的螺距为34?,其中有________对碱基,每对碱基间的转角是________。 6、Tm值常用于DNA的碱基组成分析,(G—C)%=________×2.44。
7、pH3.5电泳时,Ap、Gp、Cp、Up四种单核苷酸都是从________极走向另一极。 8、tRNA的三级结构为________型。
9、维持DNA双螺旋结构的力,主要有________和________。 10、核酸在________nm处有最大吸收峰。
11、Tm是DNA具有的一个重要特性,其定义为________。
12、引起核酸变性的因素很多,其中有________、________、________等。 13、核酸分子中含有________,所以对波长_______有强烈的吸收。
14、无论DNA或RNA都是由许许多多的________组成,通过________连接而成的。 15、己知一种DNA样品的碱基组成中,A占16%,那么G应占______%,T应占_______%,C应
占________%。
16、tRNA的主要功能是_______。各种tRNA在其_______末端有一段共有的顺序,即
_______,该末端的主要功能是与_______结合。
17、核酸的变性可使紫外光的吸收能力_______,这一现象称为_______。 18、Z-DNA是_______手螺旋,每周由_______bp构成。 19、核酸杂交技术主要是利用碱基配对原理,经_______和_______两个操作过程以检查核酸的同源型。
20、进行DNA碱基序列分析时(双脱氧法),人工合成引物与待测DNA的_______端互补,由引物按_______方向延长,形成互补链。
三、名词解释:
核苷 单核苷酸 磷酸二酯键 磷酸一酯键 核酸 DNA的一级结构
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