四川农业大学植物生理学综合实验论文(4)

(1)标准曲线制作（全班统一） 取1ml TTC（1mg/mL）于100ml容量瓶中，加乙酸乙酯约10ml及0.5g左右的保险粉，剧烈震荡，使TTC充分还原为红色的TPF并溶于乙酸乙酯，用乙酸乙酯定容至刻度。此液中TPF浓度为10μg/mL。将上述TPF溶液稀释成系列浓度，取10ml容量瓶8个，编号，依次向各管加入TPF溶液0、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00、12.00、14.00μg/mL，再加入乙酸乙酯定容至10ml。以空白做参比，在分光光度计上，测定485nm下的吸光度，绘制标准曲线。

(2)样品处理 选取约发芽种子15个，分别取长约1cm的幼苗根尖45根，吸干表面水分，迅速投入盛有2ml0.4%TTC和2ml磷酸缓冲液的反应混合夜的小瓶中，使根充分浸泡在溶液中。并把小瓶放入37℃恒温水域中保温1小时。 (3)根系活力测定 取出根尖吸干后置于研钵中，加入2-3ml乙酸乙酯和少量石英砂研磨。把红色提取液移入试管，并用少量乙酸乙酯洗涤残渣1次，合并入试管，最后加入乙酸乙酯定容至10ml，在分光光度计上测定485nm下的吸光度，查标准曲线后计算其根系活力。

1.2.3.2.2 幼苗叶片叶绿素含量(分光光度法)

(1)色素提取 剪取5片叶的中段（约4cm长），剪细并混匀，称取0.1g置于研钵，加入少许碳酸钙、石英砂和80%乙醇充分研磨，过滤，滤液入25ml容量瓶。用80%乙醇反复洗涤残渣和滤纸至无绿色，合并滤液，定容至25ml。

(2)比色测定 以80%乙醇做参比溶液，在分光光度计663nm、645nm下测定其吸光度（光密度OD）。

1.2.3.2.3 游离脯氨酸的测定（酸性茚三酮比色法）

(1)脯氨酸的浸提 取叶片数片剪碎后称取0.5g置于研钵中，加入少量80%乙醇和少量石英砂在研钵中研磨成均匀。将匀浆转入大试管，用乙醇洗涤研钵，洗涤液转入试管，乙醇总量10ml左右，摇匀，加塞，在沸水浴中浸提20min。 (2)脱色与去杂 向试管中加0.2g活性炭和0.5g人造沸石，剧烈振荡5-6min，过滤，滤液入25ml容量瓶。用乙醇洗涤试管、残渣，洗涤液一并转入容量瓶，加乙醇定容至刻度。

(3)显色反应 吸取2ml滤液于干燥的15ml刻度试管，加2ml冰醋酸、2ml酸性

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