影响ELISA实验效果常见分析(2)

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2.加样后及时放入孵箱。

3.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

4.如果采用AT或其他全自动加样，最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。

5.标本较多时，请分批操作。

孵 育 1.孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；

2.孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。 1.贴封片或加盖；

2.按说明步骤严格控制操作时间。

洗 板 1.采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。

2.采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。

3.反应板过多造成洗板等待时间长。 1.保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后最好在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干；

2.合理安排，或多用几台洗板机。

显 色 1. 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；

2. 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。 1. 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用；

2. 加样时保持显色剂不外流；

3.A、B液应避免接触金属器械。

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