糖酵解中间产物的鉴定

实验十二 糖酵解中间产物的鉴定

实验类型：验证型

目的和要求

了解糖酵解过程的某一中间步骤及利用抑制剂来研究中间代谢的方法。

原理

利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸甘油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷激甘油醛不再向前变化而积累。硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸甘油醛使不自发分解。然后用2，4-二硝基苯肼与3-磷酸甘油醛在碱怀条件下形成2，4-二硝基苯肼-丙糖的棕色复合物，其棕色程度与3-磷酸甘油醛含量成正比。

操作方法

1、取小烧杯3只，分别加入新鲜酵母0.3克，并按下表分别加入各试剂 ，混匀。 2、将各杯混合物分别倒入编号相同的发酵管内，放入37℃保温1.5小时，观察发酵管产生气泡的量有何不同。

杯号 1 2 3 5%葡萄糖（ml） 10 10 10 10%三氯醋酸 （ml） 2 - - 碘乙酸 （ml） 1 1 - 硫酸肼 （ml） 1 1 - 发酵时 气泡多少 3、把发酵管中发酵液倾倒入同号小烧杯中并在2和3号杯中按下表补加各试剂，摇匀放10分钟后和第一只烧杯中内容物一起分别过滤，取滤液进行测定。

杯号 10%三氯醋酸（ml） 2 3 2 2 碘乙酸（ml） - 1 硫酸肼（ml） - 1 4、取三个试管，分别加入上述滤液0.5毫升，并按下表加入试剂和处理。 管号 1 2 3 滤液 0.75N 室温（ml） NaOH 放置0.5 0.5 10分0.5 0.5 钟 0.5 0.5 2，4-二硝基苯肼 0.5 0.5 0.5 38℃水浴保温10分钟 0.75N 观察NaOH 结果 3.5 3.5 3.5 试剂和器材

一、试剂

（1）2，4-二硝基苯肼：0.1克2，4-二硝基苯肼溶于100毫升2N 盐酸溶液中，贮于棕色瓶备用。

（2）0.56M硫酸肼溶液：称取7.28克硫酸肼溶于50毫升水中，这时不易全部溶解，当加入NaOH使PH达7.4时则完全溶解。此液也可用水合肼溶液配制，可按其分子浓度稀释至0.56M，此时溶液呈碱性，可用浓硫酸调PH 达7.4即可。

（3）5%葡萄糖溶液 （4）10%三氯乙酸 （5）0.75N NaOH溶液 （6）0.002M碘乙酸 （7）酵母 二、器材

（1）试管（1.5×15cm） （2）吸量管（1、2、10ml） （3）恒温水浴 （4）烧杯（50ml）

思考题

实验中哪一发酵管生成的气泡最多？哪一管最后生成的颜色反应最深？为什么？

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