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卵母细胞胞浆内单精子注射成功妊娠1例

时间:2012-08-26 23:54 来源:未知 手机版
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                                     作者:姚志伟 王雁林 荣抗美 张冬梅 何秀香 孟丽芳

【关键词】  辅助生殖;显微授精;单精子注射
卵母细胞胞浆内单精子注射(ICSI)  俗称第二代试管婴儿,是目前最先进的辅助生殖技术。方法为使用显微操作技术将精子注射到卵细胞浆内,体外培养到早期胚胎,再放回母亲子宫内发育着床。主要用于治疗严重的少精、弱精、畸精和不明原因的不孕症,是目前治疗男性不育的最有效的方法。2008年初,我院生殖中心开展了这项技术,5月初治疗了第一例患者并使其成功受孕,这也是鲁北地区首例经ICSI治疗获得妊娠的患者,现介绍如下。
    1  临床资料
    1.1  一般资料  接受治疗的夫妇男方32岁,女方31岁,婚后8年未孕。经检查男方患严重的少精症并伴弱精、畸精,精子密度0.73×106/ml,活率25%;活力:a级0%,b级25%,c级0%,d级75%;畸形精子>90%。双方染色体检查均正常。
    1.2  方法
    1.2.1  控制性超排卵:采用常规体外受精胚胎移植(IVFET)超排卵方案,HCG注射36 h后经阴道超声引导下取卵,共获卵15枚。
    1.2.2  精子准备:嘱男方取卵前3 d不排精,取卵后即取精,采用直接洗涤离心法处理精液。方法为将精液与等量的含10%血清代用品(SSS)的人输卵管液(HTF)培养液混合,1 000 r/min离心15 min,弃上清,沉淀加HTF(含10%SSS) 培养液0.5 ml混合,置于5%的CO2 培养箱中备用。
    1.2.3  卵母细胞处理:取出的卵子在HTF(含10%SSS)培养液中培养4 h后,每5颗一组依次放入按说明稀释好的透明质酸酶(HYASETM10X Vitrolife)液中消化卵丘,去卵丘后共得含有第一极体的成熟卵母细胞12枚进行ICSI受精。    1.2.4  显微操作:采用ZEISS AXIOVEVT 200倒置显微镜和Eppendorf电动步进显微操作仪。显微固定针和注射针采用Humagen MPHMED35、MIC3535。显微注射前先准备一个Falcon1006培养皿,在皿中央加一个10 μl PVP(ICSITM Vitrolife)微滴,再取备好的精子混悬液5 μl加在PVP的边缘形成交接面,利于精子游入PVP。在皿周围环绕PVP用HTFHEPES培养液做4个5 μl微滴,加矿物油覆盖。将卵子移入HTFHEPES培养液滴中,1枚/滴。用显微注射针制动精子尾部,确认精子被制动后吸入精子。用显微固定针固定卵子,使第一极体位于6/12点时钟方位,吸入精子的显微注射针从3点时钟方位进入卵细胞浆内并回吸胞浆,见凹陷的卵膜有回弹现象时,说明已刺入胞浆内,即注射精子入胞浆内。退出显微注射针,并检查卵子形态是否正常。将已注射后的卵子移入HTF(含10%SSS)培养液中,置37℃、5%的CO2培养箱中培养24 h后,将胚胎再放入IVCONE(含15%SSS)培养液中至胚胎移植。
    1.2.5  观察受精和评判胚胎质量:显微受精16 h后观察受精情况,12颗卵有8颗受精,均为2 个细胞核。受精卵继续培养至72 h,按Brian Dale方法评判胚胎质量:1~2级为优质胚胎,3级为可移植胚胎,4级为劣质胚胎(胚胎碎片>50%不适合移植)。评定2级胚胎1枚,3级胚胎1枚,4级胚胎6枚。
    1.2.6  胚胎移植:取卵后72 h,将上述2、3级胚胎各一枚移入患者宫腔,移植过程顺利。
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