肿瘤个体化治疗相关基因突变检测试剂技术审查指导原则(11月)(2)

成的分析性能评估、稳定性研究、临床实验研究等技术资料完全一致。

1. 【预期用途】

应至少包括以下几部分内容：

（1） 临床背景的介绍，包括相关适用人群特征、肿瘤的组织类型、适用的样本类型、待测靶基因序列的特征及选择依据，靶基因及其表达蛋白在恶性肿瘤发生、发展过程中可能起到的作用，相关药物或其他治疗技术及其作用机理、与待测突变位点可能存在的关系等。如未与具体治疗方案联合进行相应的临床验证，以上关于靶基因突变与肿瘤疾病及治疗方案的相关性描述仅仅来自诊疗指南、书籍、文献等资料，则在说明书中应注明参考资料的出处，预期用途的相关表述中不应涉及具体药物产品（商品）名称、生产企业信息等，并注明该产品未与具体药物联合进行临床验证，仅针对靶基因突变的检测性能进行了验证；若已将试剂盒与具体药品联合进行了相关临床验证，可在此明确具体药物，并在说明书中对相关的临床研究情况进行简介。

（2） 试剂盒用于特定肿瘤患者人群，通过检测人体样本提取的核酸组分中是否存在靶基因突变，对临床上特定肿瘤患者的个体化治疗提供参考意见。肿瘤的类别及适用样本类型应结合实际的临床研究完成情况进行确认。

（3） 明确说明该试剂盒仅用于对特定肿瘤患者靶基

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因序列的检测，其检测结果仅供临床参考，不应作为患者个体化治疗的唯一依据，临床医生应结合患者病情、药物适应症、治疗反应及其它实验室检测指标等因素对检测结果进行综合判断。

2. 【检验原理】

（1） 对试剂盒检测能够覆盖的所有突变位点或突变类型进行详细描述（靶序列长度、基因座位、突变类型及相关特征等），对引物及探针设计、不同样品反应管组合、对照品设臵及荧光信号检测原理等进行逐项介绍。

（2） 核酸提取方法、原理等。

（3） 试剂盒技术原理的详细介绍，建议结合适当图示进行说明。如添加了相关的防污染组分（如UDG/UNG 酶等），也应对其作用机理作适当介绍。

3. 【主要组成成份】

（1） 详细说明试剂盒内各组分的名称、数量、内容物、比例或浓度、稳定性等信息，阴性/阳性对照品（或质控品）可能含有生物源性物质的组分，应说明其生物学来源、活性及其他特性；说明不同批号试剂盒中各组分是否可以互换。

（2） 试剂盒中不包含但对该项检测必须的组分，企业应列出相关试剂/耗材的名称、注册证号（如有）及其他必要的信息。

（3） 如果试剂盒中不包含用于核酸分离/纯化的试剂

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组分，则应在此注明经验证后推荐配合使用的商品化核酸分离/纯化试剂盒的生产企业、产品名称以及该产品的医疗器械注册证号等详细信息。

4. 【储存条件及有效期】

试剂盒的效期稳定性、开瓶稳定性、复溶稳定性、运输稳定性、冻融次数要求等。

5. 【适用仪器】

所有适用的仪器型号，并提供与仪器有关的重要信息以指导用户操作。

6. 【样本要求】 重点明确以下内容：

（1） 对适用的样本类型作详细介绍，包括样本来源及取材要求、样本处理方式（如组织样本的固定及包埋方式）、肿瘤细胞比例等。

样本的取材及处理方式等若有通用的技术规范或指南，则应遵循，并在此处引用。

（2） 样本处理及保存：核酸提取前样本的预处理、保存条件及期限（短期、长期）、运输条件等。

（3） 在提取过程结束后，可采用适当方法（如分光光度计法）对提取后的核酸储备液进行浓度、纯度检测，并依据性能验证结果在此给出用于扩增试验的核酸溶液浓度范围要求。举例：扩增反应终体系中需要50ng的DNA量，而

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在终体系中需加入25μl的DNA储备液，则在DNA提取完成后应将DNA储备液的浓度调整至2ng/μl的浓度。

如提取后的核酸储备液浓度范围不符合要求，应重新取材或扩大样本量再进行核酸提取。

（4） 操作过程中各种制备液的稳定性要求，如各类混合液（Mix）、DNA/RNA储备液、反应终体系等(常温/冷藏/冷冻/冻融次数限制等）。

7. 【检验方法】

详细说明实验操作的各个步骤，包括： （1） 试剂配制方法、注意事项。

（2） 详述核酸提取的条件、步骤及注意事项。对照品（质控品）应参与样本核酸的平行提取（如有必要），以对核酸提取环节进行合理的质量控制。

（3） 扩增反应前准备：各组分加样体积、顺序、相关注意事项等。

（4） 逆转录过程（如涉及）的温度和时间设臵、PCR各阶段的温度、时间设臵、循环数设臵及相关注意事项。

（5） 仪器设臵：特殊参数，待测基因、内标和外标的荧光通道选择等。

8. 【参考值（参考范围）】

参考值（参考范围）的描述包括基线的确定方法和循环阈值（Ct值）的要求。除Ct值要求外，建议结合是否出现

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典型S形曲线对结果进行判断。

9. 【检验结果的解释】

结合阳性对照、阴性对照以及样本管中靶基因和内标的检测结果（Ct值），对所有可能出现的结果组合及相应的解释进行详述。如存在检测灰区，应对灰区结果的处理方式一并详述。

10. 【检验方法的局限性】

（1） 本试剂盒的检测结果仅供临床参考，对患者个性化治疗的选择应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。

（2） 阴性结果不能完全排除靶基因突变的存在，样本中肿瘤细胞过少、核酸过度降解或扩增反应体系中靶基因浓度低于检测限亦可造成阴性结果。

（3） 肿瘤组织（细胞）可能存在较大异质性，不同部位取样可能会得到不同的检测结果。

（4） 不合理的样本采集、转运及处理、以及不当的试验操作和实验环境均有可能导致假阴性或假阳性结果。

（5） 明确该检测仅限于规定的样本类型及检测系统（包括适用机型、核酸提取试剂、检测方法等）。

11. 【产品性能指标】 详述以下性能指标：

（1） 对相应国家参考品（如有）检测的符合情况。

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