规范血液及骨髓标本细菌学标准操作规程(5)

湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：脓液及伤口标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 修改号：0 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-608 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 发行部门：质量管理小组 审核人：肖平 页码：第 46 页 共 62 页 养，根据生长情况及涂片染色结果，按厌氧菌生物学特性进行鉴定。

6.2.3 嗜血杆菌及奈瑟菌培养 接种于巧克力琼脂平板，置5%~10%CO2 环境中培养。 6.2.4 真菌培养 可用沙氏培养基。 7. 操作流程

8. 结果报告

查见致病菌，报告菌名和药敏结果。 9. 注意事项

9.1 对于某些特殊患者（如气性坏疽患者），在菌种鉴定及药敏试验结果尚未报出之前，根

据涂片镜检情况，采取治疗措施。

9.2 厌氧菌培养取得样本后，拭子应立即置于厌氧运送管，尽可能少让样本暴露于空气中。

穿刺时最好以针筒直接抽取，避免接触环境氧。 10. 临床意义

从脓液及创伤标本中能检出的病原微生物种类很多，最常见的由葡萄球菌和链球菌引起

发出报告 仪器或手工细菌 鉴定及药敏试验 观察菌落特征 及涂片、染色 耐氧试验 涂片染色 需氧培养 厌氧培养 脓液及创伤 感染分泌物 血琼脂平板、 中国蓝平板35 ℃ 培养18～24 h 厌氧血琼脂平板35℃厌氧培养厌氧血 平板生长 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：脓液及伤口标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 修改号：0 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-608 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 发行部门：质量管理小组 审核人：肖平 页码：第 47 页 共 62 页 的局部化脓性感染，包括有毛囊炎、疖、痈、甲沟炎、扁桃体炎、乳腺炎、中耳炎、外耳道疖肿、外耳道炎、细菌性结膜炎、脓疱疮、外科切口及创伤感染等。化脓性骨髓炎、化脓性关节炎的主要致病菌是金黄色葡萄球菌。慢性骨髓炎和慢性化脓性关节炎病原菌中，除上述细菌外，主要为结核分枝杆菌。脓液标本中可检出铜绿假单胞菌、变形杆菌和类白喉棒状杆菌等，常为继发感染或污染所致。气性坏疽主要致病菌为产气荚膜梭菌，其次为水肿梭菌、败毒梭菌及溶组织梭菌等。坏疽常继发葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌或其他需氧菌感染。器官脓肿和机体深部组织的脓肿多为厌氧菌感染。 11. 危急值报告

培养出产气荚膜梭菌及时按传染病报告。 10. 参考文献

1 CNAS-GL23《医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用指南》, 2013

2周庭银编著. 临床微生物学诊断与图解. 第二版. 上海: 上海科学技术出版社, 2007 3 叶应妩, 王毓三, 申子瑜主编.全国临床检验操作规程. 第3版 .南京: 东南大学出版社, 2006

4 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 2007 5 ISO15189:2007《医学实验室-质量和能力认可准则》, 2007

操作规程： 1标本采集：

1.1 脓肿及疖中的脓可由排液法取得。先用75％酒精擦拭病灶部位，干燥后用一无菌手术

刀片将其切开，继用无菌拭子采集标本立即置于无菌试管中。

1.2 若创伤范围广，应采取深层部位的标本，否则可能受表层微生物的污染。以注射器直

接从脓或伤口抽取液体直接送检。

1.3 怀疑有厌氧菌存在，最好以针筒直接抽取，避免样本在运送过程中，暴露在有氧环境

中，而使厌氧菌死亡。本科提供厌氧培养样本运送方式，包括： 1.3.1 黑色头活性碳厌氧输送培养管。

1.3.2 无菌塑胶容器40ml供做运送组织样本（保持潮湿）。

1.3.3 以针筒抽取脓液时，应以无菌塞子塞住针头，迅速送至微生物室。 2标本处理与涂片：

2.1 涂片检查：脓汁标本在培养的同时均须涂片，涂片的结果一方面报告临床提供最初的

诊治依据，另一方面可作为分离培养的质量指标。涂片见到的细菌均应分离到。陈旧

湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：脓液及伤口标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 修改号：0 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-608 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 发行部门：质量管理小组 审核人：肖平 页码：第 48 页 共 62 页 性脓液，其中细菌已被消化，涂片观察不到细菌，也不可能分离出细菌。 2.2 涂片直接做革兰染色，观察镜下形态是否典型，分布在细胞内、外。

2.3 破伤风和气性坏疽芽胞梭菌均为粗大的革兰阳性杆菌，注意是否有芽胞以及芽胞在菌

体内的位置。 3培养步骤：

3.1 血琼脂平板和中国蓝琼脂平板是基础的分离培养基，对于内源性感染病灶的分泌物往

往是多种细菌混合存在，且以革兰阴性菌为主，这就更需要选择培养基并以分区划线法接种。脓汁标本接种厌氧菌血平板和其他厌氧平板，置于厌氧环境孵育是非常必要的。内源性感染灶的感染源多是开口的腔道如消化道，应引起注意。分离培养得到的细菌，经纯培养后，ATB全自动鉴定后报告。

3.2 当疑有嗜血杆菌和奈瑟菌存在时，应接种巧克力平板。置CO2环境中孵育。 3.3 疑似气性坏疽，应接种卵黄琼脂，置厌氧环境孵育。

3.4 分离放线菌和奴卡菌，置平板于有氧及厌氧环境中孵育，时间至少在一周以上，每天

观察。 4报告方式：

报告所鉴定到的细菌及药敏，包括条件致病菌。 5脓液和伤口标本常见病原菌：

5.1 组织或器官的化脓性感染、其病原菌的来源可以分为两类：

5.1.1 内源性：感染源是炎症局部周围器官中的正常菌群(常栖居菌群)，由于损伤等因素造

成正常栖居菌群进入无菌状态的组织内，发生感染。

5.1.2 外源性：感染源是存在于人体外部自然界的微生物，由于外伤和直接接触，外界微生

物通过人体表面进入人体，造成感染。 5.2 常见的病原菌：

脓液及伤口分泌物中常见的病原菌

革兰阳性菌 革兰阴性菌 葡萄球菌 肠杆菌科细菌 链球菌 假单胞菌 消化链球菌 腐败谢瓦纳拉菌 炭疽芽胞杆菌 拟杆菌 破伤风芽胞梭菌 梭杆菌 产气荚膜梭菌 嗜血杆菌 溃疡棒状杆菌 产碱杆菌

湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：脓液及伤口标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 修改号：0 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-608 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 发行部门：质量管理小组 审核人：肖平 页码：第 49 页 共 62 页 结核分枝杆菌 无色杆菌 放线菌、奴卡菌 弧菌属细菌 念珠菌 气单胞菌 6脓液和伤口分泌物操作流程：

脓液、创伤分泌物

涂片、镜检 需氧培养 厌氧培养

革兰染色

抗酸性染色

血琼脂平板 厌氧血琼脂平板及

(巧克力琼脂) 硫乙醇酸钠培养基 中国蓝平板 或庖肉增菌培养基

观察菌落

涂片镜检 纯培养 鉴定 药物敏感性试验

报告 7参考文献：

《全国临床检验操作规程》（第3版）

湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：深部标本检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-609 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 50 页 共 62 页 1 目的

确定真菌的菌种，以弥补直接镜检的不足。

2 适用范围

仅适用于深部真菌中的念珠菌属培养。

3 定义

深部真菌是指侵犯表皮以外组织和器官的病原真菌和条件致病真菌。

4 测定原理和临床意义

a) 测定原理

采用平皿接种法将少量标本直接接种于培养基上（三分区划线法）进行分离培养。 b) 临床意义

假丝酵母菌（念珠菌）可引起浅部和全身性感染。浅部念珠菌病包括鹅口疮、阴道炎、角膜炎、甲沟炎等。全身性感染有支气管和肺念珠菌病，念珠菌性肠炎、膀胱炎或肾盂肾炎和心内膜炎等。 5

实验室条件

c) 实验场所

微生物组 d) 温湿度要求

室温：15-30℃ 湿度：20-80% 6

标本要求

e) 标本种类 i.标本种类

痰、尿、便、血、分泌物、穿刺液、脓液等适合做真菌培养的任何标本 ii.容器

用采集相应标本的容器或物品（注射器、棉拭子等）

iii.采集

参考其它标本SOP文件的采集方法 f)

使用条件

i.保存条件

采集的标本需及时送检。 ii.保存事项：无 7定标（必要时）

无

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