内皮细胞培养步骤(总结,)(5)

性作用：① 异种移植物内皮细胞上的MHC－1类分子不能与NK细胞抑制受体相互作用；② 异种反应抗体IgG结合猪内皮细胞可以刺激人NK细胞上的FcγⅡ受体；③ 猪内皮细胞上的α-Gal抗原决定簇可以刺激人NK细胞上的外源凝集素受体。另外Smyth等[53] 还发现人NK细胞可以促进异种抗原的表达，从而诱导对异种移植物的直接免疫应答。人类NK细胞所分泌的细胞因子例如TNFα、IL-1β、IFN-γ和 IL-3，它们都可以作用于猪内皮细胞，且人NK细胞激活猪内皮细胞后，可使内皮细胞表达E-选择素和IL-8。在体外实验中还发现NK细胞对异种内皮细 胞可产生的低水平的细胞毒性作用，而且当有异种抗体IgG存在时，这种毒性作用可被加强。更重要的是，NK细胞还可以激活内皮细胞，使内皮细胞具有的抗凝 功能转变为促凝功能。

Miyagawa等[54]发现降低α-Gal抗原决定簇在猪内皮细胞上的表达后，猪内皮细胞对NK细胞介导的细胞毒性的敏 感性也有降低，说明α-Gal抗原决定簇可以影响人NK细胞和猪内皮细胞之间的相互作用。但也有一些学者认为人NK细胞和猪内皮细胞的相互作用并不依赖于 α-Gal抗原决定簇。利用猪VCAM-I特异性的单克隆抗体可以减少NK和单核细胞对猪内皮细胞的跨膜迁移，因此应用这种单克隆抗体有可能抑制异种移植 中炎性细胞的浸润[55]。非经典MHC-I类分子HLA-G和HLA-E可以与NK细胞上的抑制受体结合，从而抑制NK细胞的溶细胞作用。Forte等 [56]在最近的研究中发现，HLA-G分子可以与NK细胞表面的杀伤细胞抑制性受体ILT-2结合，

从而抑制NK细胞生物学活性。在体外实验中利用转基 因技术，使猪血管内皮细胞表达人HLA-G基因，可以明显的抑制NK细胞对猪内皮细胞的粘附和杀伤作用。 Matsunami等[57]的研究也表明HLA-G或HLA-E基因转染的猪血管内皮细胞可以抑制NK细胞的溶细胞作用，而且联合转HLA-G和 HLA-E基因可以增强对NK细胞的抑制功能。

另外最近研究证明猪内皮细胞对人γδT细胞介导的异基因毒性反应有高度的敏感性。活化的人γδT细 胞对猪内皮细胞有排斥反应作用。γδT细胞的细胞毒性对异种基因内皮细胞的作用可能是异种移植的一大障碍。当考虑应用特殊方法抑制异种移植排斥反应 时，γδT细胞可作为一研究重点[58]。

综上所述，内皮细胞的激活是异种排斥反应的中心环节，移植物内皮系统是受者免疫系统最直接攻击的靶部 位，异种排斥反应的发生、发展都与移植物内皮细胞的活化有着十分密切的联系。移植物被植入异种受者体内后，可以通过经典途径和替代途径激活受者补体，最终 形成攻膜复合体沉积于移植物内皮细胞表面，损伤和激活内皮细胞。内皮细胞活化后引起一系列的病理改变，包括其表面抗凝分子减少或丢失，使内皮细胞表型由抗 凝变为促凝，使血小板活化、聚集，最终形成移植物血管内凝血，使移植物功能丧失。另外受者NK细胞、单核细胞等炎性细胞对移植物内皮细胞的细胞毒性作用更 加重了内皮细胞的损害。虽然利用抑制补体和消除天然抗体等方法在一定程度上可以抑制内皮细胞的活化，但其功效只是暂时的。近来利用转基因

技术，使猪血管内 皮细胞表达人补体调节蛋白或敲除天然抗原Galα1,3-Gal等研究已经取得了突破，相信随着分子生物学和基因工程技术的不断成熟，利用转基因技术修饰 供体器官血管内皮细胞将成为克服异种排斥反应的一种主要途径。 参 考 文 献 * 主要文献 ** 重要文献

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