药学综合考研之药物分析重点名词解释和问答题总结(4)

定量分析方法如下：

内标法加校正因子测定供试品中主成分含量 外标法测定供试品中主成分含量

注意事项：1. 压力表无压力显示或压力波动时不能进行分析，应检查过滤器是否污染，流路中气泡是否已排除，各连接处有无漏液，排除故障后方能进行操作。特别是压力升高，甚至自动停泵，应从线路过滤器、泵头、柱头、检测器腔及流路有无堵塞，及时处理。

2.当基线漂移过大，可能是：色谱柱未平衡或柱内污染；检测器受温度变化影响；检测池渗漏。出现上述问题时，应逐项排除，必须待仪器稳定后方能进行分析操作。 3.流动相使用前需用相应的0.45μm的滤膜过滤、脱气，一般用超声波脱气。

28、简述紫外分光光度法在药物分析中的应用和操作中注意问题 常应用于药物的鉴别，主成分的含量测定，特殊杂质的检查。

常用方法：对照品比较法，吸收系数法，计算分光光度法，比色法。 注意问题：

1.仪器的校正和检定

2.对溶剂的要求：含有杂原子的有机溶剂通常均具有很强的末端吸收，他们的使用范围均不能小于截止使用波长。

五、回答问题并计算（共20分）

杂质限量、容量法、紫外分光光度法、HPLC

非水溶液滴定法、酸性染料比色法、亚硝酸钠滴定法、一般容量分析法在实验中的应用，包括方法原理，试剂，步骤的目的意义，计算，影响因素，干扰及排除 ，操作注意事项

1、UV 原理：

紫外分光光度法是以朗伯比尔定律为基础，由于物质分子中价电子能级跃迁对辐射的吸收，而产生化合物的可见紫外吸收光谱。基于物质对光的选择性吸收的特性而建立分光光度法或吸收光谱法的分析方法。 对溶剂的要求

含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，它 们的使用范围均不能小于截止使用波长。例如甲醇、乙醇的截止使用波长为205nm。另 外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。因此，在测定供试品前，应先检查所用的溶 剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即将溶剂置1cm 石英吸收池中，以空气为 空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸光度。溶剂和吸收池的吸光度，在220～ 240nm 范围内不得超过0.40，在241～250nm 范围内不得超过0.20，在251～300nm 范围内不得超过0.10，在300nm 以上时不得超过0.05。 2.含量测定 一般有以下几种。

（1）对照品比较法按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，

对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100%±10％，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后，按下 式计算供试品中被测溶液的浓度：

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cX=（AX／AR）cR

式中 cX 为供试品溶液的浓度； AX 为供试品溶液的吸光度 cR 为对照品溶液的浓度； AR 为对照品溶液的吸光度。

（2）吸收系数法按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其

吸光度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，吸收系数通常应大于100，并注意仪器的校正和检定。

（3）计算分光光度法计算分光光度法有多种，使用时均应按各品种项下规定的

方法进行。当吸光度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，波长的微小变化可 能对测定结果造成显著影响，故对照品和供试品的测试条件应尽可能一致。计算分光光 度法一般不宜用作含量测定。 （4）比色法供试品本身在紫外-可见区没有强吸收，或在紫外区虽有吸收但为避免干扰或提高灵敏度，可加入适当的显色剂显色后测定，这种方法为比色法。

用比色法测定时，由于显色时影响显色深浅的因素较多，应取供试品与对照品或标 准品同时操作。除另有规定外，比色法所用的空白系指用同体积的溶剂代替对照品或供 试品溶液，然后依次加入等量的相应试剂，并用同样方法处理。在规定的波长处测定对照品和供试品溶液的吸光度后，按上述（1）法计算供试品浓度。

当吸光度和浓度关系不呈良好线性时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充

至同一体积，显色后测定各份溶液的吸光度，然后以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并求出其含量。

2、杂质限量

方法原理：药物的纯度是相对的，绝对纯净的药物是不存在的，由于药物中的杂质不可能完全除尽，也没有必要完全除尽，对于药物中所存在的杂质，在不影响疗效，不产生毒性和保证药物质量的原则下，允许药物中含有一定量的杂质。药物中所含杂质的最大允许量，叫做杂质限量。

杂质最大允许× 100% 杂质限= 量供试品量 量%

单位通常以%或百万分之几（ppm , 10–6)表示。

方法：

限量检查法和对杂质进行定量测定，限量检查法包括：1、对照法: 以待检杂质标准液一定量为对照，将供试品、对照分别置一支纳氏比色管或锥形瓶中，在相同条件处理后，比较反应结果。2、灵敏度法: 在供试液中直接加入试剂，在一定反应条件下观察有无反应出现。 3、比较法: 取一定量供试品测定特定待检杂质的参数与规定的限量比较。

标准溶液的浓度*标准溶液的体积供试品量限量检查法计算：杂质限量=×100%

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C*VL（%）=S×100%

L----杂质限量 S-----供试品量

C、V-----标准液浓度、体积

计算时应注意：单位换算、供试液或标准液的稀释倍数

注意事项：1、须注意平行原则，即供试溶液和对照溶液应在完全相同的条件下反应，如加入的试剂、反应的温度、放置的时间等均应相同，这样检查的结果才有可比性。2、纳式比色管应在白色背景下观察。

3、容量法 特点：容量分析法是将已知浓度的滴定液由滴定管加到待测药物的溶液中，直到所加滴定液与被测药物按化学计量反应完全为止，然后根据滴定液的浓度和消耗的体积可以计算出被测物的含量。

在进行容量分析时，如何准确地确定等当点就成了容量分析的关键问题。必须借助指示剂的颜色变化来确定滴定终点。需要选择合适的指示剂，使滴定终点尽可能的接近等当点。 容量分析通常用于测定高含量或中含量组分，即含量在1%以上。此法操作简便、快速、比较准确，使用仪器普通易得。

1、滴定度：每1ml某摩尔浓度的滴定液所相当的被测药物的重量。单位mg 2、滴定度的计算 aA+bB→cC+dD

T=m×a/b×M(mg/ml)

m为滴定液的摩尔浓度（mol/L），a为被测药物的摩尔数，b为滴定液的摩尔数，M为被测药物的毫摩尔质量(分子量,以mg表示) 3、校正因子

在实际工作中，所配制的滴定液的摩尔浓度与药典中规定的摩尔浓度不一定恰好符合，此时就不能直接应用药典上所给出的滴定度（T），需乘以滴定液浓度校正因数（F）即可换算成实际的滴定度（T'），即

T'=T× F 式中 F=实际摩尔浓度/规定浓度

3、含量计算 滴定方式有两种，即直接滴定法和间接滴定法 （1）直接滴定法

含量（%）=（V×T×F）/W×100%

V为滴定液被消耗的体积,W为供试品的称取量，T为滴定度,F为校正因子 （2）间接滴定法

1)生成物滴定法：本法系指被测药物与化合物A作用，定量生成化合物B,再用滴定液滴定化合物B。该法的百分含量计算方法与直接滴定法相同，只是在计算的滴定度时需考虑被测药物与化合物B以及化合物B与滴定液三者之间的化学计量关系。 2)

此法是先加入定、过量的滴定液A，使其与被测药物反应，待此反应进行完全后，再用另一滴定液B来回滴反应中剩余的滴定液A。

0S

含量（%）=（VB-VB）×FB×TA/W×100%

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VB为空白试剂时消耗滴定液B的体积， VB为样品测定时消耗滴定液B的体积， FB 为滴定液B的浓度校正因子，TA 为滴定液A的滴定度，,W为供试品的称取量

4、HPLC

色谱法的分离原理是：溶于流动相中的各组分经过固定相时，由于与固定相发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。 步骤：

1． 配置流动相（包括流动相脱气）、样品等准备工作 2.洗色谱柱、走基线 3.设置工作站样品表 4.进样

5.处理剩余样品、打印图谱、计算含量

6.常用流动相溶剂甲醇、氯仿、正丁醇水等，首选甲醇-水 计算：内标法、外标法 HPLC使用注意事项

1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜 过滤)。

2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。 3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然 后用甲醇(或甲醇水溶液)冲 洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆 外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。

5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。

6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。 7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。

8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查 并清洗。清洗方法；①以异 丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清 洗；⑧用10％稀硝酸清洗。

9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。

10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相 的清洗。 11.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。

12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的 流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。

5、亚硝酸钠滴定法：药物分子结构中具有芳伯氨基或水解后具有芳伯氨基，在酸性溶液中可与亚硝酸钠反应，可用亚硝酸钠滴定法测定含量。

基本原理：芳伯氨基或水解后生成芳伯氨基的药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量发生重氮化反应，生成重氮盐，可用永停滴定法指示反应终点。 H+

Ar—NHCO+H2O ArNH2 + RCOOH ArNH2 + NaNO2 + 2HCl Ar—N2+Cl- + NaCl + 2 H2O

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0S

反应历程： NaNO2 + HCl HNO2 + NaCl

HNO2 + HCl NOCl + H2O NO+Cl-

ArNH2 ArNH-NO ArN=N-OH Ar—N2+Cl- 慢 快 快 反应条件：（1）加入适量HBr，加快反应速度。

（2）酸的种类及其用量（HCl：虽然在HBr中较之在HCl中快，但价格昂贵，H2SO4和HNO3中反应较慢，且芳香伯胺的盐酸盐溶解度较H2SO4盐大，故常选用HCl。用量：理论用量为ArNH2 ：HCl = 1 ：2 ；但实际用量要多得多，通常为ArNH2 ：HCl = 1 ：2.5~6）。

（3）反应温度：温度升高，反应速度增快，但形成的重氮盐亦随温度的升高而迅速分解；且温度过高，HNO3也易逸失或分解，而使结果偏高，故药典规定在较低的温度下进行，一般是10~30

(4)滴定速度：为了避免HNO3逸失或分解，滴定时可将滴定管尖端插入液面下2/3处，一次将大部分NaNO2在搅拌下滴入，使其尽快反应，然后提出液面，再缓慢滴定至终点。

终点指示方法：永停滴定法、电位法、外指示剂法、内指示剂法。

6、容量分析法（滴定法），是将已知浓度的滴定液（标准物质溶液）由滴定管滴加到被测药物的溶液中，直至滴定液与被测物反应完全，然后根据滴定液的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系计算出被测药物的含量。

1. 滴定度（T）的概念 每1ml某摩尔浓度的溶液相当于被 测物质的重量(mg)。

2. 滴定度的计算 aA + bB cC + dD T = M×b/a×B

B为滴定液的摩尔浓度，M为被测药物的毫摩尔质量

例：用碘量法测定维生素C的含量时，滴定液的摩尔浓度我0.05mol/L,化学反应为: C6H8O6+I2——C6H6O6+2HI

T=m×a×b×M=O.O5×1×176.13=8.806（mg/ml） 3. 百分含量的计算

（1）直接滴定法 D% = V ×F × T/W ×100% F = 实际标定的浓度/规定的浓度 （2）间接滴定法（回滴定法；剩余滴定法） D% = （VO – VB) ×F ×T/W ×100%

例：司可巴比妥钠M=260.23，司可巴比妥钠与溴反应的摩尔比为1:1，供试品的称量W=0.1022g，硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）,浓度校正因数F=1.038,供试品滴定消耗硫代硫酸钠滴定液15.73ml，空白试验消耗硫代硫酸钠滴定液23.21ml.溴滴定液（0.05mol/L） T=0.05×1×260.23=13.01（mg/ml）

司可巴比妥含量(%)=（VO – VB) ×F ×T/W ×100%=(23.21ml-15.73) ×1.038×13.01/(0.1022×1000) ×100%=98.8%

7、酸性染料比色法

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