临床检验基础实验指导 - 图文(5)

【注意事项】

1、抽血要顺利，抗凝要充分，不可有凝血块；分离血浆时，务必去除血小板。 2、水浴温度控制在37_+0．5℃，过高或过低均会影响结果。 3、样品收集时不宜用EDTA和肝素作抗凝剂。 4、本试剂盒所含MS溶液忌冰冻。

5、复溶试剂按每天使用量取适量预热，未用完之预热试剂应弃去。复溶试剂请勿冰冻保存。

6、本方法对于凝血因子活性40％的样品欠敏感。

7、如果血球压积<20％或>50％，则需调整血样与抗凝剂的比例，方法是：0．00185 3血液毫升数3(100--压积)抗凝剂毫升数。 【贮存】

试剂2-8℃保存有效期12个月。 复溶试剂2-8℃保存有效期3天。

四、纤维蛋白原含量测定（Fibrinogen, Fib）

【原理】

纤维蛋白原与凝血酶作用形成不溶性纤维蛋白，因而血浆在加入适量凝血酶后即逐渐凝固，凝固时间与血浆中纤维蛋白原的浓度呈负相关。以国际标准品为参比血浆制作“凝固时间（s）——纤维蛋白原的浓度（g/L）”标准曲线。测定被检血浆的凝固时间，被检血浆的纤维蛋白原含量即可从标准曲线上查得。 【器材】 水浴箱、 试管、试管架、 加样抢、吸头、离心机、秒表 【试剂】

1、 冻干正常参比血浆 2、冻干纤原试剂 3、 稀释液 4、凝血酶（冻干品）

【样品收集和保存】

静脉采血，血样与抗凝剂(0.109mol／L枸橼酸三钠)的比例为9：1，轻轻颠倒混匀，以2700g(相当于离心半径18cra约3500转／分)离心10分钟，分离血浆待测。如该血浆不能立即分析，应将其密封放2--8℃保存：最长不超过4小时，或立即置于一20℃以下冻存不超过30天，用时37℃融化，避免反复冻融。

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【操作方法】 1、试剂准备：

（1）冻干正常参比血浆加0．5ml蒸馏水，即为正常参比血浆。

（2）冻干纤原试剂每瓶加1.0ml蒸馏水，即为纤原试剂。用前37℃预温3分钟

以上，但不可超过30分钟。 2、标准曲线制作

（1）将正常参比血浆用稀释液作1:5、1:10 1:20、1:40稀释。 （2）取不同稀释度的正常参比血浆0.2ml，置37℃预热3分钟。 （3）加入纤原试剂0.1ml,立刻计时，记录凝固时间。

（4）标准曲线的获得：将以上测定时间与纤维蛋白原浓度值对应即可获得。 3、样品测定

（1）将样品用稀释液作1:10稀释待用。

（2）取稀释后的待测血浆0．2ml，于370C预热3分钟，加入纤原试剂0.1ml，立刻计时记录凝固时间。将凝固时间代入标准曲线，即可得到纤维蛋白原浓度。 如采用仪器测定，请参考仪器使用说明书。 【报告方式】 3．3 3 g／L 【参考区间】

2．0-4．0g／L

建议各实验室使用健康正常人血浆，建立自己的参考值范围。 【注意事项】

1、不同仪器判断终点有所不同，故所得凝固时间及标准曲线会有所不同。但同一批次试剂均应获得较理想的重复性及线性。

2、标准曲线制作中，可根据检测方法的不同、仪器的灵敏度和操作说明以及检测要求等具体情况进行多点选择。

3、抗凝血酶物质的存在会影响实验结果。

4、不同批次纤原试剂效价可能不一样，请严格按测定步骤1．2指示量复溶 5、如果血球压积<20％或>55％，则需调整血样与抗凝剂的比例血液毫升数3(100一压积) 抗凝剂毫升数

6、复溶试剂按每天使用量取适量预热， 【贮存】

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本试剂2-80C保存有效期12个月 复溶试剂2—8℃保存有效期3天。

复溶试剂请勿冰冻保存。

五、凝血酶时间(Thrombin time, TT)测定

【原理】

在血浆中加入标准化的凝血酶溶液，在凝血酶的作用下，血浆凝固所需要的时间即凝血酶时间。

【器材】 水浴箱、 试管、试管架、 加样抢、吸头、离心机、秒表 【试剂】

1、冻干凝血酶 10X2.0ral 2、正常参比血浆 【样本收集和保存】

静脉采血，血样与抗凝剂(0．109mol拘橼酸三钠)的比例为9：1轻轻颠倒混匀2700g(离心半径18cm约3500转／分)离心10分钟，分离血浆待测。如该血浆不能立即分析，应将其密封放2—80C保存，最长不超过4天，或立即置于-20C以下冻存不超过30天，用时370C融化，避免反复冻融。 【操作方法】

1、每瓶冻干凝血酶加2ml蒸馏水复溶即为TT应用试剂超过30分钟。 2、取待测血浆0．2ml，370C预温2分钟。

3、加入TI'应用试剂0．2ml混匀，立刻计时如采用仪器测定，请参考仪器使用说明书。

【报告方式】 患者 3 秒，正常对照 3 秒 【参考区间】

16一18秒，超过正常对照3秒以上为异常。建议各实验室使用健康正常人血

浆。

【注意事项】

用前370C预热。预热时间不记录凝固时间，即为凝血酶时间(TT)。建立自己的参考值范围。

1、抽血要顺利，抗凝要充分，决不可有凝血块。

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2、浴温度控制在37±0．5℃，过高或过低均会影响结果。 3、样本收集时不宜用EDTA和肝素作抗凝剂。

4、观察凝固时，光线要充足，必要时作双份测定，可报告其均值。

5、批次复溶凝血酶的量应按测定步骤1的指示量进行，或者用正常参比血浆的凝固时间16--18秒作为控制标准，如偏离此范围，可适当增或减稀释液的用 6、如果血球压积<20％或>55％，则需调整血样与抗凝剂的比例血液毫升数3(100—压积)抗凝剂毫升数 【贮存】

本试剂2—8℃保存有效期12个月 复溶试剂2—8C保存有效期3天。

实 验 五

—血型鉴定与配血（Blood group typing and matching of blood）

【内容】

1、AB0血型鉴定 2、Rh血型盐水介质法鉴定 3、交叉配血试验 （1）盐水介质配血法 （2）聚凝胺介质配血法 【目的要求】

1、掌握AB0血型鉴定的原理、方法及临床意义。 2、掌握交叉配血的原理及临床意义。

3、掌握 Rh血型鉴定的原理、方法及临床意义。 【器材】

试管、双凹玻片、显微镜、竹签、离心机 【试剂】

抗A标准血清、抗B标准血清、 抗D血清、5％红细胞盐水悬液。

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【实验】

实验一 ABO血型鉴定 （ABO blood group typing）

【原理】

根据红细胞上有或无A抗原或／和B抗原，将血型分为A型B型AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗一A和抗一B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或／和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或／和抗-B。 【试剂】

1、抗A标准血清 2、抗B标准血清 3．受检者血清

4．受检者5％红细胞盐水悬液 【操作方法】 1．试管法

(1)取洁净小试管(内径10mm360mm)3支，分别标明抗-A、抗-B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A+B分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加人受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混和。

(2)另取洁净小试管(内径10mm360mm)3支，分别标明A、B型细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液1滴，混和。

(3)立即以1000r／min离心1min。

(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

(5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。

(6)凝集强度判断标准

4+=红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3+=红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。

2+=红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。

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