临床检验基础实验指导 - 图文(3)

100

白细胞数／L=10310/L3—————— ＝8．3310/L 100+20

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二、白细胞分类计数(Different count简称DC)

(一)血片制备法

1、自手指端取血一小滴置于玻片一端，把推片的一端放在血滴前方，将推片略向后移，并左右移动一二次使血滴散开。

2、使推片与玻片之间形成30-40度角，均匀向前推成一个厚薄均匀，头、体尾分明的血片。 见图5。

(二)瑞氏染色法 【原理】

瑞氏染色液中含有甲醇，起固定细胞的作用，其中还含有碱性染料(美兰及小量天青)和酸性染料(伊红)，在一定PH下细胞蛋白质因等电点不同，可选择性的吸附上述染料而着色。 【染色方法】

1、待血片干燥后，于血膜上滴加瑞氏染色液数滴以盖住血膜为宜，静置约一分钟。

2、再加等量的缓冲液与染液混匀(边加边用洗耳球打气或口吹)，静置8—10分钟，染色的时间随室外温度升高而适当缩短，反之可延长。 3、用自来水缓缓的将染料液冲去，干后油镜分类。 【分类方法】

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1、将染好的血片先用低倍镜观察选染色良好，厚薄适宜，细胞分布均匀处，以油镜进行分类。

2、在血片的体尾交界处滴加香柏油一滴，用油镜对好视野，以曲径推动血片，向尾部上下迂回移动，如图6白细胞分类的镜检顺序。同时将遇到的各类白细胞分别记录下来至总数达100个为止，每类的白细胞数目即为其百分率，一般来说粒细胞、单核细胞以及体积大的细胞多分布于涂片上下边缘及其尾端，淋巴细胞多分布于体部。 (图6)

3、各种白细胞绝对值计算，由每立方毫米内的白细胞总数，乘以该白细胞的百

分数，

即得出绝对值。

如：白细胞数为10 3109/L，淋巴细胞为30％，淋巴细胞的绝对值为： 10330％=33109/L

【报告方式】 以国际单位（比值）报告 【参考区间】

嗜中性杆状核粒细胞(neutrophilic stab granulocyte Nst)0—5％国际单位0—0.05

嗜中性分叶核粒细胞(N Neutrophil) 50—70％ 国际单位0.5—0.7

嗜酸性粒细胞 (E Eosinophil) 0.5—5％ 国际单位0.005—0-05 嗜碱性粒细胞 (B Basophil) 0—1％， 国际单位0—0.01 淋巴细胞 (L Lymphocyte) 20—40％， 国际单位0.2—0.4 单核细胞 (M Monocyte) 3-8％， 国际单位0.03—0.08 【注意事项】

l、在白细胞分类计数时，如遇到幼稚红细胞，要注意不要将此种细胞包括在白细胞的百分数内，应另行报告。

2、儿童的白细胞分类计数，其正常值随年龄的大小而不同，特别是淋巴细胞的

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变化较大。新生儿及2岁以内的幼儿淋巴细胞可高达0.7—0.8，3—5岁时，淋巴细胞约为0.42—0．6， 6—8岁时为0.5左右，8—14岁则接近成人。

三、白细胞常见的病理形态(示教)

中毒颗粒、空泡变性、大小不均等。

实 验 三

血液一般检验（三）General Examination of Blood

【内容】

1、网织红细胞计数 2、红细胞比积测定（示教) 3、红细胞沉降率测定（示教) 【目的要求】

1、掌握网织红细胞计数标本送检要求、原理和方法。 2、熟悉红细胞比积测定及红细胞沉降率检测原理和方法。 3、了解红细胞比积测定及红细胞沉降率检测标本送检要求。

【实验】

一、网织红细胞计数 (Recitudocyto Count)

（试管法）

【原理】

网织红细胞是晚幼红细胞脱核后到完全成熟的红细胞之间的尚未完全成熟的红细胞，由于其胞浆中尚残存核糖体等嗜碱性物质，因而用煌焦油兰染液进行活体染色后，胞浆中可见浅兰绿色和深兰色的网状结构，故名为网织红细胞。 【试剂】

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10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液：煌焦油蓝1g，枸橼酸钠0.4g，氯化钠0.85g溶于双蒸馏水l00ml中，过滤后备用。 【操作方法】

取干燥洁净小试管一只，滴加煌焦油兰生理盐水溶液一滴，加入病人指端血液3-4滴(贫血者多加几滴)混匀，l0分钟再混匀取一小滴推成薄膜片，干燥后用油镜检查，分类计数1000个红细胞，求出其中网织红细胞百分率，以国际单位（比值）或绝对值报告。 【注意事项】

1、血膜宜薄，以免使细胞重叠、挤缩而影响计数。 2、用二甲苯擦片后，可使结果偏低。 【报告方式】

网织红细胞百分率： 以国际单位（比值）报告 网织红细胞绝对值： XXX 3109/L 【参考区间】

成人 0.5—1.5％ 平均1％， 国际单位0.005—0.015 新生儿 3—6％ 国际单位0.03—0.06

成人网织红细胞绝对值(2.4—8.4万／uL) 国际单位(24—84) 3109/L 【网织红细胞绝对数的计算】

%网织红细胞3红细胞数/立方毫米 网织红细胞绝对数值=—————————————————— 100

举例：设网织红细胞百分率为1％，红细胞数为500万／立方毫米，则

1%13500万/立方毫米

网织红细胞绝对数值=—————————————=5万/ul

100

【附注】

如因视野太小。其中红细胞太多，以至视觉混乱，无法数清时，可在接目镜内，先接上一个中间开一个矩形的硬圆纸片，将视野缩小(见图7甲)或先粘上四根头发(见图7乙)，以便计数。

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二、红细胞比容

( Determination of Hematocrit Hct)测定(示教)

【原理】

将定量的抗凝血液用一定速度和时间离心沉淀后，观察压实红细胞与全血体积的比值(L/L)，称为红细胞比容，它的多少与红细胞数量和大小有关． 【操作方法】

1、静脉穿刺取血2mL，放入肝素抗凝剂(肝素钠0.2mg)的小试管内充分摇匀，防止凝固。

2、用长的毛细管取上述血液将其插到温氏血管底部，将血徐徐注入至“0”刻度处。

3、置离心机内，以每分钟3000转的速度离心30分钟。

4、取出温氏管观察红细胞高度并加以记录，再将温氏管同上述速度再离心5分钟，至红细胞不再下降为止，乘以0.01即为每升血液中红细胞体积的升数，以L/L为单位报告结果。

【报告方式】 0. 3 3 【参考区间】

成年男性0.42—0.49L／L (42—49％)

成年女性0.37—0.43 L／L (37—43％)

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