广东省动物源沙门菌PMQR和ESBLs基因流行分布调查(2)

blaTEM blaOXA

(94℃，5min)+{(94℃，30s)+（53℃，30s）+(72℃，60s）}×35+（72℃，10min）

(94℃，5min)+{(94℃，30s)+（53℃，30s）+(72℃，60s）}×35+（72℃，10min）

2 结果

2.1 药敏试验（总耐药情况，PMQR、ESBLs阳性菌耐药情况）

72株沙门菌对兽医临床常用抗菌药物做药敏检测见表3。参照CLSI2007 抗菌药物感性试验执行标准，从表中可以看出，PMQR 阳性菌对抗菌药物的耐药性普遍较为严重。对氨苄西林的耐药率为100%，环丙沙星86.11%，萘啶酸100%，氯霉素97.22%，四环素100%，庆大霉素94.44%，头孢噻肟70.83%。对其它药物的耐药率分别为链霉素84.95%，恩诺沙星100%，卡那霉素90.28%，氟苯尼考100%，头孢曲松52.78%，头孢他啶41.67%，喹乙醇93.06%。PMQR 阳性菌株对头孢西丁的敏感性最高，其耐药率仅为1.39%。其次是头孢噻呋，耐药率 31.94%。结果显示，大部分PMQR 阳性菌株对8种以上药物耐药。（多重耐药）（表型与基因型之间关系）（三类喹诺酮耐药机制介导的耐药水平情况）

表3 PMQR 阳性大肠杆菌对16 种抗菌药的药敏试验

Table 3 Susceptibility of 93 PMQR-positive E. coli isolates to16 antimicrobial agents

药物Drug 百分数（%） AMP CTX CTR CXT CTZ CTF GEN KAN STR TET CIP NAL CHL FLF ENR OQX

菌株数（百分数）NO. of isolates(percentage)

敏感 中介 耐药

0 0 100% 26.39% 2.78% 70.83% 47.22% 0 52.78% 93.05% 5.56% 1.39% 56.94% 1.39% 41.67% 59.72% 8.34% 31.94% 4.16% 0 94.44% 6.94% 2.78% 90.28% 19.44% - 80.56%

0 0 100% 4.17% 9.72% 86.11%

0 0 100% 2.78% 0 97.22%

0 0 100% 0 0 100% 6.94% 0 93.06%

AMP：氨苄西林，CTX：头孢噻肟，CTR：头孢曲松，CXT：头孢西丁，CTZ：头孢他啶，CTF：头孢噻呋，GEN：庆大霉素，KAN：卡那霉素，STR：链霉素，TET：四环素，CIP：环丙沙星，NAL：萘啶酸，CHL：氯霉索，FLF：氟苯尼考， ENR：恩诺沙星，OQX：喹乙醇。

2.2 PMQR基因的检测

72株沙门菌中未检测到qnrB、qnrC和qepA。其中，qnrA有5株，qnrD有亚型qnrD1 18株，qnrS有两个亚型：qnrS1(3株)和qnrS2(1株)，oqxAB有19株，aac(6)-Ib-cr 共有24株。qnrA、qnrD1、qnrS、aac（6′）-Ib-cr，oqxAB 的检出率见表4。携带多个基因的检出情况如表5。

表4 阳性菌株数量

Table 4 Quantity of positive isolates

基因Gene qnrA qnrD1 qnrS oqxAB aac(6')-Ib-cr

数量NO. 5 18 4 19 24

百分数Percent(%) 6.94% 25% 5.56% 26.39% 33.33%（分析原因）

表5 携带多个基因菌株的检测结果

Table5 Detection of multiple-gene

基因Gene

qnrA、aac(6')-Ib-cr qnrD、aac(6')-Ib-cr qnrS、aac(6')-Ib-cr oqxAB、aac(6')-Ib-cr qnrA、qnrD qnrA、qnrS qnrD、qnrS qnrS、oqxAB、aac(6')-Ib-cr

qnrD、qnrS、oqxAB、aac(6’)-Ib-cr 百分数

数量NO. Percent(%) 1 1.39% 6 8.33% 2 2.78% 8 11.11% 1 1.39% 1 1.39% 1 1.39%

2 2.78%

1 1.39%

喹诺酮类药耐药严重原因之一 危险性 2.3 ESBLs基因的检测 72株沙门菌ESBLs的检测结果见表6。它们带有一种或多种ESBLs家族中的基因,其中，blaCTX-M基因有blaCTX-M-15（1株）、blaCTX-M-79（2株）、blaCTX-M-14（2株）、blaCTX-M-24（2株）、blaCTX-M-27（1株），blaCMY-2有7株，blaPER-1仅有1株，blaTEM基因有blaTEM-1（38株）、blaTEM-53（3株），blaOXA-1共有50株，各种亚型基因有交叉携带现象。

表6 ESBLs家族及其各亚型的分布情况 Table 6 Distribution of ESBLs genes

类型

blaCTX-M-1G

CTX-M-15 CTX-M-79

blaCTX-M-9G

CTX-M-14 CTX-M-24 CTX-M-27

blaPER-1 blaCMY-2 blaTEM

TEM-1 TEM-53

blaOXA

blaOXA-1

50

69.44%

2 2 1 1 7 38 3

2.78% 2.78% 1.39% 1.39% 9.72% 52.78% 4.17%

菌株数

1 2

百分数（%） 1.39% 2.78%

3 讨论

从药敏试验结果可以看出，本研究分离到的沙门菌株对临床常用抗菌药物耐药情况较为严重，提示耐药基因的存在可能是细菌具有耐药性的主要因素。从表3可以看出，头孢类药物的耐药性较低，而其他类药物，如氨基糖苷类、喹诺酮类药物的耐药性很高，有的可达100%。耐药情况较严重，这可能是由于本菌所分离的养殖场长期滥用抗生素导致。

本研究没检测到qnrB、qnrC和qepA。qnrA、qnrD、qnrS的检出率依次为6.94%，25%和5.56%。aac(6’）-Ib-cr 和oqxAB的检出率最高，分别为33.33%和26.39%。本研究中沙门菌株oqxAB 基因阳性率高于韩国、巴西和日本[7-9]，可能是由于国内各种喹诺酮类药物的使用量较大，促进了细菌对对喹诺酮类药物耐药性的产生。2006、2007年德国和土耳其分别报道从鸡分离到沙门菌中检测到

qnrS[10-11],qnrD是2008年首次在病人分离的沙门菌中鉴定出的[12],目前为止国内关于沙门菌此类基因的报道较少，而本研究中检测到数量较多，说明PMQR基因流行率有所提高，需要引起重视。由表5可以看出，PMQR 基因常常共存于同一菌株，形成蓄积，提高了细菌对抗菌药物的耐药性。且耐药基因谱型错综复杂，有9种组合方式。以oqxAB、aac（6′）-Ib-cr 的联合方式最为常见，其次为qnrD、aac(6’)-Ib-cr，有6株菌。同时携带qnrD、qnrS 、oqxAB和aac（6′）-Ib-cr 基因的菌株数较少，aac（6′）-Ib-cr 经常同其它PMQR 耐药基因同时存在，同时携带3 种或3 种以上耐药基因的菌株数较少。本研究中检出的同时包含多个耐药基因的菌株概率较高，与Yue[13]等人之前所作的相关研究结果相比，有上升趋势，应引起足够重视。

ESBLs基因在72株沙门菌中的检出率为CTX-M(11.11%)、PER（1.39%）、

CMY-2(9.72%)、TEM（56.94%）、OXA（69.44%），没有检测到VEB、GES、SHV基因。CTX—M型ESBLs在世界各地的流行分布存在差异，欧洲国家主要流行CTX-M-15，南美地区主要类型为CTX-M-2和CTX—M-9[14]，韩国以CTX-M-14型和CTX-M-15型分布最为广泛[15]。我国2006年报道了临床大肠埃希菌CTX-M-14的流行占绝对优势[16]。本研究检测出CTX-M-14产酶株，说明CTX-M-14已在食品动物沙门菌中传播扩散。通常由质粒介导的TEM和OXA内酰胺酶可通过点突变产生新的衍生酶来增宽其所能作用的底物范围[17] ，本研究检测到TEM-1、TEM-53和OXA-1等亚型，需引起重视。另外值得注意的是，近年来有关单一菌株同时产多种ESBIs[18] 以及由产复合ESBLs菌株[19-20]引起医院感染暴发流行的报道屡有出现。在本研究中有27株菌检出≥2种的耐药基因，显示出多重耐药的趋势。对临床分离菌ESBLs的基因分型检测，可以加强对产ESBLs的菌株的监测，有望为临床治疗提供更合理的治疗方案，以降低耐药性的发生率。 4.结论

本研究结果表明，PMQR和ESBLS基因在中国广东省养殖场的流行已经非常普遍，且PCR阳性沙门菌耐药较严重，对兽医临床上常用药物耐药率较高。虽然PMQR基因单独存在时仅介导细菌对喹诺酮药物低水平耐药，但多个PMQR 亚型基因经常共存于同一菌株，或与β-内酰胺酶基因共存于同一质粒，增强了细菌对药物的适应性，加速耐药基因传播。此外，PMQR基因阳性菌在喹诺酮药物选择压力下，更容易诱发染色体突变，从而导致菌株高水平耐药。因此，应加强PMQR和ESBLs基因检测，以便指导临床合理使用抗菌药物，预防与控制耐药基因传播流行。

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