2014-9 神经生物学实验报告-动物脑的立体定位技术

脑立体定位技术及切片制备

一、实验目的

通过本实验，了解动物脑立体定位及切片制备，并基本掌握动物脑立体定位技术及切片制作。 二、实验设备及要求

实验分两部分： Ⅰ 大鼠脑立体定位（纹状体）

[器材和药品]

立体定位仪、10％水合氯醛溶液、1ml注射器、手术刀、粗剪刀、组织剪、止血钳、牙科钻或骨钻、金属定位针、脱脂棉花、3%双氧水（H2O2）、生理盐水、75%酒精，墨水。

[实验动物]

雄性SD大鼠（200-300 g） Ⅱ 大鼠脑切片制备

[器材和药品]

器械：手术刀、组织剪、止血钳、咬骨钳、无齿钳、5ml注射器、6号针头、灌注瓶、恒冷切片机

液体：4％多聚甲醛溶液

三、实验步骤

Ⅰ 大鼠脑立体定位（纹状体）

1. 立体定位仪的一般校验

2. 动物麻醉：动物称重后，水合氯醛溶液按3.6ml/kg作腹腔注射麻醉。 3. 头部固定：

（1）插入耳棒：先将一侧耳棒轻轻插入外耳道，碰到骨性外耳道底后固定耳棒，继之同样插入固定另一耳棒。检查大鼠头部固定是否稳定，松斜，两侧耳棒刻度是否对称，轻移耳棒使两侧刻度一致头位完全居中，再次固定耳棒。三个

标准检测是否固定成功：鼻对正中，头部不动，提尾不掉。

（2）固定上颌：将大鼠的上门牙塞进上齿固定板的槽内，旋紧螺丝。从各方向推压动物头部，均不应出现移动。通过定位针的测量调节前后囟在同一矢状线上，并使前后囟在同一水平线上。

4. 开颅：剪去头部的毛，用75%酒精棉球作头部皮肤的消毒，沿矢状缝作切口，剥离筋膜及肌肉，推开骨膜，并用3%双氧水洗净，用干棉球擦拭，暴露

骨缝，止血。

5. 脑内核团定位:

（1）根据脑图谱，确定所要纹状体的立体位置，（纹状体：前囟前1 mm, 旁开2.5 mm, 深 3.5 mm）。

（2）用定位针参照中线和前后囟在颅骨上标记进针的部位后，在指定位置钻孔，有突破（落空）感后，停止钻孔。

6. 定位标记及组织学鉴定：

（1）定位标记：根据定位坐标，插入微量注射针，注入染料。

（2）组织学鉴定：动物处死后，大鼠用左心室—主动脉插管（右心室开孔，便于灌洗液流出），先后用生理盐水和4%多聚甲醛溶液灌流固定, 取脑作冰冻连续切片，观察确定注射位置是否准确。（第二部分实验详述） Ⅱ 大鼠脑切片制备

1. 组织固定（灌注固定） （1）减开胸腔，暴露心脏

（2）将注射针头插入左心室，减开右心耳

（3）放松输液管夹，先用生理盐水冲去血液，直至右心耳流出液体清亮无色（一般原则灌洗量不宜过多，灌洗时间不宜长。大鼠一般100ml）

（4）换以固定液继续灌流，先快后慢，固定液的量，大鼠一般为300-500ml左右

（5）开颅取脑，固定→切片

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